Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Acetil-DNMT1 (K1127/K1129/K1131/K1133) (P26358) para IHC-P, IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da DNA (citosina-5)-metiltransferase 1

A DNMT1 é uma DNA metiltransferase crítica responsável por manter os padrões de metilação de CpG durante a replicação do DNA, garantindo a herança epigenética. Ela metila preferencialmente DNA hemi-metilado e associa-se a focos de replicação na fase S, mas também atua independentemente da replicação durante as fases G2 e M para preservar a paisagem global de metilação. O silenciamento mediado pela DNMT1 envolve interação direta com a HDAC2 e formação de complexos correpressores que modulam modificações de histonas e expressão gênica. Referências relacionadas: PMID:17200670, PMID:18754681, PMID:21745816, PMID:26070743, PMID:10888872, PMID:24623306

A enzima localiza-se predominantemente no núcleo e é recrutada para a cromatina nos focos de replicação via seu domínio RFTS, que reconhece a histona H3 ubiquitinada. Ela também se localiza em regiões perinucleolares, refletindo funções especializadas na manutenção da heterocromatina. Referências relacionadas: PMID:12145218, PMID:24492612, PMID:29053958

A DNMT1 é expressa de forma ubíqua, com níveis particularmente altos em tecidos fetais, coração, rim, placenta e células mononucleares do sangue periférico, e expressão mais baixa em baço, pulmão, cérebro, intestino delgado, cólon, fígado e músculo esquelético. Referências relacionadas: PMID:10325416

Modificações pós-traducionais da DNMT1, especialmente a acetilação, desempenham papéis regulatórios-chave. O cluster de lisinas alvo deste anticorpo (K1127/K1129/K1131/K1133 na isoforma 1) corresponde a sítios de acetilação conhecidos (K1111/K1113/K1115/K1117/K1119/K1121 na sequência canônica) que são modificados por histona acetiltransferases e podem influenciar a estabilidade, localização e interação da proteína com outros fatores epigenéticos. Referências relacionadas: PMID:21947282, PMID:19608861

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Este anticorpo policlonal de coelho foi produzido contra um peptídeo acetilado sintético abrangendo K1127, K1129, K1131 e K1133 da DNMT1 humana. Espera-se que reconheça especificamente a forma acetilada da proteína.
• Para IHC-P, métodos padrão de recuperação de antígeno (por exemplo, recuperação de epítopo induzida por calor em tampão citrato, pH 6.0) podem ser necessários para expor o epítopo. A diluição ótima do anticorpo e as condições de incubação devem ser determinadas empiricamente.
• Ao realizar IF/ICC, a fixação com paraformaldeído a 4% seguida de permeabilização com Triton X-100 a 0,1% é comumente usada; no entanto, essas etapas devem ser validadas no sistema celular ou de tecido específico.
• O ELISA pode ser usado para detectar e quantificar os níveis de DNMT1 acetilada em lisados celulares ou extratos teciduais. Considere empregar um ensaio de competição com peptídeo para confirmar a especificidade de ligação.
• Como a DNMT1 é amplamente expressa, inclua controles positivos e negativos apropriados (por exemplo, tecidos ou linhagens celulares com status de acetilação conhecido) para verificar os padrões de coloração.
• O peso molecular previsto é de 183 kDa; se reutilizar o anticorpo para aplicações não validadas (por exemplo, Western blot), valide o tamanho da banda e a especificidade de acordo.

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