Anticorpo Monoclonal de Coelho Acetil-Histona H3-K14 (Q16695 / P68431) para WB, DB, ChIP, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

• A Histona H3 é um componente central do nucleossomo, que envolve e compacta o DNA em cromatina, regulando assim a acessibilidade do DNA para transcrição, replicação, reparo e manutenção da estabilidade cromossômica. Este papel é essencial para todos os processos dependentes de DNA. Referências relacionadas: PMID:16185088, PMID:16267050
• As isoformas H3, H3.1 (codificadas por múltiplas cópias de genes, por exemplo, HIST1H3A-J) e H3.1t (específica de testículo, codificada por HIST3H3) compartilham o mesmo domínio de dobra de histona e são localizadas principalmente no núcleo e nos cromossomos. A H3.1t é expressa especificamente em células testiculares, enquanto a H3.1 canônica é amplamente expressa.
• Modificações pós-traducionais de histonas, especialmente acetilação, metilação, fosforilação e outras, constituem o "código de histonas" que governa a dinâmica da cromatina. A acetilação na lisina 14 da histona H3 (H3K14ac) é uma marca de cromatina ativa e é reconhecida por proteínas contendo domínio de bromo. Referências relacionadas: PMID:16267050, PMID:16627869
• O anticorpo visa especificamente a forma acetilada do K14, permitindo o estudo da regulação transcricional mediada por H3K14ac e marcas epigenéticas.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo acetilado sintético em torno do K14 da Histona H3 humana. Ao projetar anticorpos semelhantes, considere o uso de um peptídeo acetilado para garantir a especificidade para a forma acetilada.
• Para Western blotting (WB), valide o anticorpo usando lisados de células inteiras de células humanas, de camundongo ou de rato. O tratamento com inibidores de histona desacetilase (por exemplo, TSA ou butirato de sódio) pode aumentar o sinal e confirmar a detecção dependente de acetilação.
• Na imunoprecipitação de cromatina (ChIP), os protocolos padrão de reticulação e cisalhamento são adequados. A inclusão de controles apropriados (por exemplo, competição com peptídeo não acetilado, IgG de coelho normal) é recomendada para garantir a especificidade de grau ChIP.
• Para aplicações de ELISA e dot blot (DB), use peptídeos H3K14 acetilados versus não acetilados como controles positivos e negativos para verificar a ligação.
• A reatividade cruzada com camundongo e rato foi observada; no entanto, os usuários devem validar o anticorpo em seu sistema experimental específico, pois a expressão do alvo e os níveis de modificação podem variar.

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