Anticorpo monoclonal de coelho Acetil-Histona H3-K14 (Q16695/P68431) para WB, ChIP, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

• A Histona H3 é um componente central do nucleossomo, a unidade fundamental da cromatina, que empacota o DNA e regula o acesso para transcrição, replicação, reparo e estabilidade cromossômica. Os nucleossomos consistem em aproximadamente 146 pares de bases de DNA enrolados em torno de um octâmero de histonas (duas cópias de cada uma: H2A, H2B, H3 e H4).
• A acetilação na lisina 14 da Histona H3 (H3K14ac) é uma marca epigenética bem caracterizada associada a genes ativamente transcritos e regiões de cromatina aberta. Ela é catalisada principalmente por histone acetiltransferases como GCN5/PCAF e é reconhecida por proteínas que contêm domínio bromo. Referências relacionadas: PMID:16457588, PMID:16185088, PMID:16267050, PMID:17194708
• A Histona H3.1 canônica (codificada por vários genes incluindo HIST1H3A, etc., SWISS P68431) é expressa de maneira dependente da replicação durante a fase S e depositada em todo o genoma. Em contraste, a Histona H3.1t (SWISS Q16695, gene H3-4/HIST3H3) é uma variante específica do testículo que substitui a H3 canônica durante a espermatogênese.
• Tanto a H3.1 quanto a H3.1t compartilham um alto grau de identidade de sequência, incluindo a região N-terminal que contém o K14. O imunógeno do anticorpo, um peptídeo sintético acetilado em K14, garante o reconhecimento específico dessa modificação em ambas as variantes.
• A localização subcelular da Histona H3 é nuclear, onde ela está predominantemente associada aos cromossomos. A especificidade tecidual da H3.1t é restrita às células testiculares, enquanto a H3.1 é ubíqua.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Design do Imunógeno: O anticorpo foi desenvolvido contra um peptídeo sintético acetilado ao redor do K14 da H3 humana, garantindo alta especificidade para a forma acetilada. Ensaios competitivos usando peptídeo não acetilado podem ser usados para confirmar a ligação específica à modificação.
• Western Blotting (WB): A Histona H3 migra em aproximadamente 15 kDa sob condições padrão de SDS-PAGE. Para detecção ideal, considere usar extratos nucleares e extração ácida suave para enriquecer as proteínas histonas. Sempre inclua controles positivos e negativos adequados (por exemplo, células tratadas com inibidores de histona desacetilase vs. não tratadas).
• Imunoprecipitação de Cromatina (ChIP): Este anticorpo está indicado para aplicações de ChIP; no entanto, a otimização da reticulação, do corte da cromatina e da concentração do anticorpo pode ser necessária dependendo das regiões genômicas alvo e do tipo de célula.
• Imunofluorescência/Imuno-histoquímica (IF/IHC): É esperada coloração nuclear. Para seções emblocadas em parafina (IHC-P), pode ser necessária a recuperação de antígeno. Valide a especificidade do anticorpo com peptídeos de bloqueio ou por comparação com controles de isótipo.
• Reatividade por Espécie: O anticorpo reage de forma cruzada com humano, camundongo e rato devido à alta conservação da sequência ao redor do K14. Para outras espécies, verifique o alinhamento da sequência antes do uso.
• Informações Gerais: Como anticorpo monoclonal de coelho, ele oferece alta afinidade, consistência entre lotes e baixo background. Armazene a -20°C e evite ciclos repetidos de congelamento e descongelamento.

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