Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Histona H3-K18 Acetilada (Q16695/P68431) | Validado para WB, IHC, ChIP, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

• A Histona H3 é uma proteína nucleossomal central que enrola e compacta o DNA em cromatina, limitando a acessibilidade às maquinarias dependentes de DNA e desempenhando um papel central na regulação da transcrição, reparo de DNA, replicação de DNA e estabilidade cromossômica. Referências relacionadas: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• Localiza-se no núcleo e associa-se aos cromossomos. Referências relacionadas: UniProtKB Q16695, UniProtKB P68431

• A H3.1 canônica é codificada por múltiplos genes (ex., H3C1, H3C2) e é expressa de forma dependente de replicação em células somáticas. A variante H3.1t (Q16695) é expressa especificamente em células testiculares. Referências relacionadas: UniProtKB Q16695

• A Histona H3 sofre extensas modificações pós-traducionais que constituem o "código de histonas". A acetilação na K18 (posição 19 na sequência canônica da H3) é uma marca chave ligada à ativação transcricional e ao reparo de DNA. Esta modificação é regulada dinamicamente por HATs e HDACs. A acetilação neste local foi documentada em múltiplos estudos. Referências relacionadas: PMID:19608861, PMID:16267050, PMID:16627869, PMID:17194708, PMID:35939806

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo acetilado sintético em torno da K18 da Histona H3 humana. O anticorpo monoclonal de coelho resultante deve reconhecer especificamente a H3K18 acetilada, sem reação cruzada com a K18 não modificada ou outros sítios de acetilação. Valide a especificidade usando ensaios de competição com peptídeos acetilados e não acetilados ou tratando células com inibidores de HDAC.
• Para Western blotting (WB), prevê-se uma banda única em ~16 kDa. Use controles de carregamento apropriados (ex., Histona H3 total ou anticorpos C-terminais da H3) para normalizar os níveis de acetilação. Os sinais de acetilação podem ser aumentados tratando células com inibidores de desacetilases como tricostatina A (TSA) ou butirato de sódio.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P) e imunofluorescência (IF/ICC), otimize as condições de recuperação de antígenio e permeabilização. A extinção da peroxidase endógena é recomendada para IHC-P. Valide a coloração comparando com controles de isotipo.
• Para imunoprecipitação de cromatina (ChIP), certifique-se de que as condições de reticulação sejam otimizadas para modificações de histonas. Use loci de controle positivos e negativos apropriados (ex., genes ativamente transcritos vs. loci silenciados). A eficiência de enriquecimento pode ser verificada por qPCR.
• Devido à ampla reatividade cruzada prevista (humano, camundongo, rato e outros), confirme a reatividade na espécie de interesse antes de prosseguir com experimentos em grande escala. O alinhamento de sequências mostra alta conservação da região ao redor da K18 em vertebrados.
• Para aplicações de ELISA e dot blot (DB), o anticorpo pode ser usado para detectar peptídeos H3K18 acetilados ou histonas recombinantes. Considere usar um anticorpo secundário biotinilado e estreptavidina-HRP para amplificação de sinal.

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