Anticorpo Monoclonal de Coelho Acetil-Histona H3-K27 para ChIP, WB e IHC (SWISS: Q16695 / P68431)

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3 (acetilação K27)

• A histona H3 é um componente central do nucleossoma, que envolve e compacta o ADN em cromatina, limitando assim a acessibilidade do ADN às máquinas celulares que requerem o ADN como molde. As histonas desempenham um papel central na regulação da transcrição, reparo do ADN, replicação do ADN e estabilidade cromossómica. A acessibilidade do ADN é regulada dinamicamente por um conjunto complexo de modificações pós-traducionais (PTMs), coletivamente conhecidas como código de histonas, e pelo remodelamento de nucleossomas. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431
• A histona H3 localiza-se principalmente no núcleo e é um componente estrutural chave dos cromossomas. Encontra-se tanto na eucromatina como na heterocromatina, onde os seus padrões de PTM distinguem estes estados. Referências relacionadas: UniProt Q16695, UniProt P68431
• Duas isoformas principais são representadas pelos acessos SWISS Q16695 (histona H3.1t específica do testículo) e P68431 (histona H3.1 dependente da replicação), que é amplamente expressa. A variante específica do testículo é expressa exclusivamente em células testiculares. Referências relacionadas: UniProt Q16695
• A histona H3 sofre uma vasta gama de modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, metilação, fosforilação, ubiquitinação e ADP-ribosilação. A acetilação de resíduos específicos de lisina é uma marca epigenética crítica associada à ativação transcricional. Por exemplo, a acetilação na lisina 19 (K19ac) foi identificada por múltiplos estudos (PMID:19608861). Embora a base de conhecimento UniProt não anote atualmente a acetilação em K27, esta modificação é uma marca bem caracterizada na literatura. A marca de acetil-lisina é regulada dinamicamente por histona acetiltransferases (HATs) e desacetilases (HDACs), influenciando a estrutura da cromatina e a expressão génica. Referências relacionadas: PMID:19608861, UniProt Q16695

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio é um peptídeo acetilado sintético em torno da K27, indicando a especificidade do anticorpo para o estado acetilado. Verifique a especificidade usando competição com peptídeo não acetilado ou controlos de desacetilação enzimática.
• Este anticorpo foi validado para uma vasta gama de aplicações: Western Blot (WB), Dot Blot (DB), Imuno-histoquímica-Parafina (IHC-P), Imunofluorescência/Imunocitoquímica (IF/ICC), ELISA, Imunoprecipitação de Cromatina (ChIP) e ChIP-seq. Para aplicações de ChIP, considere a otimização da reticulação e da concentração do anticorpo para o seu contexto específico de cromatina.
• O peso molecular previsto é de 15 kDa. Use géis de SDS-PAGE de alta percentagem (por exemplo, 15%) ou géis de gradiente para uma resolução ideal de proteínas de baixo peso molecular.
• A reatividade cruzada é prevista para Humano, Camundongo, Rato e outras espécies (Ampla Gama Prevista) com base na conservação da sequência da histona H3. Valide na sua espécie alvo se não estiver especificamente listada.
• Os protocolos de extração de histonas (extração ácida ou alto teor de sal) podem melhorar o sinal no WB enriquecendo para proteínas nucleares.
• Para aplicações quantitativas, considere o uso de histona H3 recombinante com e sem acetilação K27 como padrões.

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