Anticorpo policlonal de coelho Acetil-Histona H3-K9/K14/K18/K23/K27 (Q16695/P68431) para WB, IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H3

A Histona H3 é um componente central do nucleossomo, a unidade repetitiva fundamental da cromatina. Como parte do octâmero de histonas, ela desempenha um papel essencial no enrolamento e compactação do DNA, limitando assim a acessibilidade do DNA à maquinaria celular que requer o DNA como molde. Essa base estrutural permite que as histonas regulem de forma central a transcrição, o reparo do DNA, a replicação do DNA e a estabilidade cromossômica.

A cauda N-terminal da Histona H3 está sujeita a extensas modificações pós-traducionais (MPTs), incluindo acetilação, metilação, fosforilação e outras, que constituem um complexo "código das histonas". Essas modificações controlam dinamicamente a arquitetura da cromatina e a expressão gênica. Especificamente, a acetilação nos resíduos de lisina 9, 14, 18, 23 e 27 neutraliza a carga positiva das lisinas, enfraquecendo a interação entre as histonas e o DNA. Isso leva a uma conformação de cromatina mais aberta (eucromatina) e está fortemente associada à ativação da transcrição. As marcas de acetilação nesses locais são reconhecidas por proteínas contendo bromodomínio e remodeladores de cromatina, facilitando o recrutamento da maquinaria de transcrição. Referências relacionadas:

• PMID:16627869
• PMID:19608861

A Histona H3 está localizada principalmente no núcleo e nos cromossomos, onde é incorporada à cromatina durante a replicação do DNA (para variantes dependentes de replicação, como a H3.1) ou de maneira independente da replicação (para variantes de substituição). A proteína canônica H3.1 (codificada por múltiplos genes, incluindo HIST1H3A–J) é expressa em muitos tecidos, enquanto a variante H3.1t específica de testículo (H3-4, codificada por HIST3H3) é encontrada nas células testiculares. Ambas as variantes compartilham a sequência conservada da cauda N-terminal contendo as lisinas acetiladas alvo deste anticorpo.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo acetilado sintético que abrange K9, K14, K18, K23 e K27 da Histona H3 humana. Esse desenho multissítio permite a detecção ampla de H3 hiperacetilada; recomenda-se verificar a especificidade usando controles de peptídeo não acetilado em ensaios competitivos.
• Para Western blotting, a extração ácida de histonas ou o fracionamento enriquecido em cromatina pode melhorar a relação sinal-ruído; recomenda-se a normalização da carga com um anticorpo de Histona H3 total para levar em conta o possível mascaramento do epitopo por outras MPTs.
• Em imunofluorescência/ICC, a permeabilização com Triton X-100 ou digitonina pode aumentar a penetração do anticorpo no núcleo; as condições de fixação devem ser otimizadas para equilibrar a acessibilidade do epitopo e a morfologia.
• Aplicações de ELISA podem se beneficiar da inclusão de revestimentos com peptídeos acetilados e não acetilados para confirmar a ligação seletiva.
• A reatividade cruzada prevista com humanos, camundongos, ratos e outras espécies sugere utilidade em múltiplos sistemas modelo; no entanto, a validação no sistema de amostra específico e no contexto experimental é essencial.

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