Anticorpo Policlonar de Coelho para Acetil-Histona H4 (K12) para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P62805

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H4

A Histona H4 é uma das quatro histonas core que formam o nucleossomo, a unidade repetitiva fundamental da cromatina. Como uma proteína estrutural altamente conservada, desempenha um papel essencial no empacotamento e organização do DNA no núcleo, influenciando diretamente a expressão gênica, a replicação do DNA, o reparo e a estabilidade cromossômica.

Referências relacionadas: UniProtKB P62805

A função da Histona H4 é regulada dinamicamente por uma vasta gama de modificações pós-tradução (PTMs), denominadas coletivamente de 'código da histona'. A acetilação em resíduos específicos de lisina, incluindo a lisina 12 (K12, correspondente a K13 na UniProt P62805), é uma marca epigenética chave que modula a estrutura da cromatina e promove a transcrição ativa. A acetilação nesse resíduo foi documentada em múltiplos estudos.

Referências relacionadas: PMID:17967882 PMID:2474456 PMID:7664735 PMID:19608861

A localização subcelular da Histona H4 é predominantemente nuclear, onde ela se associa ao DNA cromossômico. Padrões específicos de acetilação, como em K12, podem influenciar sua dinâmica de localização durante processos como a espermatogênese.

Referências relacionadas: UniProtKB P62805

Estruturalmente, a proteína Histona H4 tem aproximadamente 11,4 kDa, e é codificada por múltiplas cópias gênicas (por exemplo, H4C1, H4C2, etc.) que produzem uma sequência proteica idêntica. Essa multiplicidade garante os altos níveis de expressão necessários para a montagem da cromatina. Devido à extrema conservação evolutiva da sequência da Histona H4 entre espécies, anticorpos direcionados a essa proteína frequentemente apresentam ampla reatividade cruzada.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Desenho do Imunógeno: Este anticorpo foi desenvolvido contra um peptídeo acetilado sintético ao redor de K12. Para detecção específica, considere que o anticorpo pode reconhecer preferencialmente a forma acetilada; a validação com amostras tratadas com inibidores de desacetilase pode aumentar o sinal.
• Western Blotting (WB): A Histona H4 tem baixo peso molecular (~11 kDa). Use géis de SDS-PAGE de 15% ou gradiente e garanta uma transferência eficiente (por exemplo, transferência úmida overnight a baixa tensão) para evitar perda de proteínas pequenas. Inclua marcadores de peso molecular apropriados e confirme a especificidade com ensaios de competição com peptídeo não acetilado, se necessário.
• Imunohistoquímica (IHC-P) e Imunofluorescência (IF/ICC): A recuperação de antígeno (por exemplo, tampão de citrato, pH 6,0) pode melhorar a acessibilidade do epítopo. Use tecidos controle positivos com transcrição ativa ou proliferação (por exemplo, testículo, timo) e considere bloquear biotina ou peroxidases endógenas de acordo com protocolos padrão.
• ELISA: Para análise quantitativa, revesta as placas com peptídeo H4 acetilado ou extratos de histonas e verifique a especificidade do peptídeo usando controles não acetilados.
• Reatividade Cruzada: Prevê-se que o anticorpo tenha reatividade cruzada com Histona H4 acetilada de humano, camundongo, rato e muitas outras espécies. Valide em seu sistema experimental para descartar a ligação a H4 não acetilado ou outras proteínas acetiladas, especialmente dada a natureza policlonal do anticorpo.
• Abordagens Alternativas: Se for necessária alta especificidade apenas para a marcação acetil-K12, considere o pareamento com um anticorpo monoclonal ou o uso de ensaios de competição sítio-específicos para confirmar o reconhecimento do epítopo.

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