Anticorpo Policlonário de Coelho para Acetil-Histona H4-K16 (P62805) para WB e ELISA – Pesquisa em Epigenética

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H4

• Componente central do nucleossomo: A Histona H4 é uma das quatro histonas centrais que formam o octâmero do nucleossomo, ao redor do qual o DNA se enrola para formar a cromatina. Essa estrutura fundamental restringe a acessibilidade ao DNA e, dessa forma, regula a transcrição, o reparo do DNA, a replicação e a estabilidade cromossômica. Referências relacionadas: UniProt P62805
• Localização subcelular: Em condições de equilíbrio, a histona H4 é encontrada predominantemente no núcleo, intimamente associada aos cromossomos. A acetilação, como a que ocorre no resíduo K16, influencia sua localização dinâmica; por exemplo, a H4 acetilada é observada no núcleo de espermátides na etapa 11. Referências relacionadas: UniProt P62805
• Modificações pós-traducionais e o código das histonas: A Histona H4 está sujeita a uma vasta gama de modificações pós-traducionais (MPTs) em sua cauda N-terminal, incluindo acetilação, metilação, fosforilação, ubiquitinação e várias marcas de acilação (por exemplo, crotonilação, butirilação, succinilação). Essas modificações constituem um "código das histonas" que governa a estrutura da cromatina e a expressão gênica. A acetilação em resíduos específicos de lisina, incluindo o K16, é uma marca característica da eucromatina transcricionalmente ativa. Referências relacionadas: UniProt P62805
• Significado funcional da acetilação de K16: A acetilação de H4 na lisina 16 (H4K16ac) é particularmente crítica para o dobramento de ordem superior da cromatina e a regulação transcricional. Essa modificação neutraliza a carga positiva da lisina, interrompendo as interações internucleossômicas e promovendo uma conformação de cromatina aberta. Ela está envolvida na compensação de dosagem, reparo de danos ao DNA e envelhecimento celular. Referências relacionadas: PMID:2474456, PMID:7664735, PMID:19608861 (acetilação geral em histonas)
• Conservação evolutiva: A sequência de aminoácidos da histona H4 é notavelmente conservada entre eucariotos, desde leveduras até humanos, o que fundamenta a ampla faixa de reatividade cruzada prevista para este anticorpo. Referências relacionadas: UniProt P62805

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Considerações sobre o desenho do imunógeno: O anticorpo foi produzido contra um peptídeo acetilado sintético correspondente aos resíduos ao redor da lisina 16 da histona H4 humana. Esse desenho garante especificidade para o estado acetilado de K16; no entanto, a reatividade cruzada com H4 não modificado ou outras lisinas acetiladas deve ser avaliada no seu sistema experimental.
• Diretrizes para Western Blot (WB): Ao realizar WB, considere usar extratos de histonas de células completas ou histonas extraídos por ácido de células humanas, de camundongo ou de rato, pois a reatividade cruzada prevista é ampla. Devido ao pequeno peso molecular (~11 kDa), use SDS-PAGE a 15% ou géis de gradiente para uma resolução ideal. Valide a especificidade comparando os sinais com controles não acetilados ou usando inibidores de desacetilases (por exemplo, TSA, butirato de sódio) para confirmar o engajamento do alvo.
• Aplicações em ELISA: Este anticorpo pode ser adequado para a detecção baseada em ELISA de peptídeos de H4 acetilados ou histonas purificadas. Confirme as concentrações ideais do antígeno de revestimento e considere o bloqueio com tampões de bloqueio não fosforilados/não acetilados para reduzir o ruído de fundo.
• Reatividade cruzada entre espécies: Uma ampla reatividade cruzada é prevista com base na alta conservação evolutiva da sequência da histona H4. Embora tenha sido relatado que o anticorpo reage com humano, camundongo e rato, recomenda-se a verificação em outras espécies devido a possíveis diferenças nas MPTs.
• Nota técnica geral: Como acontece com todos os anticorpos específicos para MPTs, certifique-se de que a preparação da amostra minimize a atividade desacetilase endógena (por exemplo, inclua inibidores de HDAC no tampão de lise) para preservar o sinal de acetilação.

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