Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Acetil-Histona H4-K5 (P62805) – Validado para WB, IHC-P, ELISA, ChIP

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Histona H4

• A Histona H4 é um componente central do nucleossomo, responsável por enrolar e compactar o DNA em cromatina. Essa compactação restringe a acessibilidade do DNA, desempenhando assim um papel central na regulação da transcrição, reparo do DNA, replicação do DNA e estabilidade cromossômica. Referências relacionadas: UniProt P62805

• A proteína localiza-se principalmente no núcleo e associa-se aos cromossomos. Foi observada localizada no núcleo quando acetilada em espermátides no estágio 11. Referências relacionadas: UniProt P62805

• A Histona H4 sofre extensas modificações pós-traducionais (PTMs) em sua cauda N-terminal, que em conjunto constituem o "código das histonas". A acetilação na lisina 5 (o alvo deste anticorpo) é uma modificação chave associada a estados de cromatina ativa. Referências relacionadas: PMID:2474456, PMID:7664735, PMID:19608861

• Modificações adicionais incluem metilação, fosforilação e várias acilações, que se coordenam para regular a expressão gênica e outros processos com molde de DNA. Referências relacionadas: UniProt P62805

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Desenho do imunógeno: O anticorpo foi produzido contra um peptídeo sintético abrangendo os aminoácidos 1-100 da Histona H4 humana, que inclui a cauda N-terminal e o epítopo Lis5 acetilado. Considere usar peptídeo não acetilado ou mutante (K5A) como controle negativo para confirmar a especificidade.
• Western Blot (WB): A Histona H4 tem um peso molecular previsto de ~11 kDa. Garanta uma separação adequada em géis de SDS-PAGE de alta porcentagem (ex.: 15-18%) e verifique a intensidade da banda normalizada para controles de carga total de histonas (ex.: Histona H3, H4 total).
• Imunohistoquímica-Paraffina (IHC-P): A recuperação antigênica é recomendada devido à natureza compacta da cromatina; tampão citrato (pH 6,0) ou Tris-EDTA (pH 9,0) podem ser testados. Os padrões de acetilação podem variar conforme o tecido e as condições de fixação.
• ELISA: O anticorpo pode ser usado para detectar peptídeos de histonas acetiladas ou histonas extraídas com ácido diretamente revestidas em placas. Otimize a concentração de revestimento e as etapas de bloqueio para minimizar o fundo.
• Imunoprecipitação da Cromatina (ChIP): Adequado para o mapeamento genômico de loci H4K5ac. O tempo de reticulação e as condições de fragmentação da cromatina devem ser determinados empiricamente para cada tipo de amostra. Recomenda-se um Western blot pós-ChIP para confirmar o enriquecimento.
• Reatividade cruzada: A sequência do imunógeno é altamente conservada entre humano, camundongo e rato, e o fabricante prevê uma ampla reatividade. Valide na sua espécie de interesse por alinhamento de sequência e testes preliminares.

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