Anticorpo policlonal de coelho Acetil-HMGB1 (Lys29) (P09429) para WB, IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Proteína de Alta Mobilidade B1 (HMGB1)

• HMGB1 é uma proteína cromossômica não histona altamente abundante e expressa de forma ubíqua que funciona como uma chaperona de DNA, regulando a transcrição, replicação, reparo de DNA e estabilidade do genoma. Ela também atua como um padrão molecular associado a danos (DAMP) extracelular durante lesões e inflamação. Referências relacionadas: PMID:33147444, PMID:27362237

• A localização subcelular do HMGB1 é regulada dinamicamente. Em condições basais, ele reside predominantemente no núcleo, mas trafega continuamente entre o núcleo e o citoplasma. Após determinados estímulos ou estresse, ele sofre modificações pós-traducionais, incluindo a acetilação de resíduos de lisina chave dentro dos seus sinais de localização nuclear (NLS1: aa 28-44, NLS2: aa 179-185), promovendo seu acúmulo citoplasmático e secreção ativa por meio de uma via não convencional mediada por lisossomos. Referências relacionadas: PMID:12231511, PMID:17114460

• A acetilação na Lisina 29 (K29) é uma das várias modificações críticas que regulam o tráfego do HMGB1. A hiperacetilação da região NLS1, incluindo K29, interrompe a importação nuclear e facilita a relocação do HMGB1 para o citoplasma e sua eventual liberação no espaço extracelular, onde pode exercer atividades semelhantes a citocinas. Referências relacionadas: UniProt P09429

• No ambiente extracelular, o estado redox do HMGB1 determina sua função: HMGB1 totalmente reduzido atua como quimiocina, HMGB1 dissulfeto como citocina e HMGB1 oxidado promove a tolerância imunológica. O HMGB1 extracelular se liga a receptores como RAGE, TLR2 e TLR4 para ativar respostas imunes inatas, tornando-se um mediador crítico na sepse, doenças autoimunes e câncer. Referências relacionadas: PMID:23446148, PMID:23519706

• HMGB1 também desempenha papéis na patogênese microbiana, facilitando a entrada do SARS-CoV-2 e outros vírus, e regulando a autofagia e a ativação do inflamassoma. Referências relacionadas: PMID:35239449, PMID:22696656

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Devido à natureza reversível da acetilação, inclua inibidores de desacetilases (ex.: tricostatina A, nicotinamida) nos tampões de lise para preservar o HMGB1 acetilado durante a preparação da amostra.
• Para Western blotting, o peso molecular esperado do HMGB1 é de ~25 kDa, mas modificações pós-tradicionais podem causar ligeiros desvios. Use células em fase log inicial ou células estimuladas como controles positivos.
• Na imunofluorescência/ICC, o sinal de acetil-HMGB1-K29 pode ser predominantemente citoplasmático ou extracelular após a indução da acetilação (ex.: tratamento com LPS), em comparação com a marcação nuclear em células em repouso.
• Para aplicações de ELISA, considere usar este anticorpo como reagente de captura ou detecção pareado com um anticorpo pan-HMGB1 para quantificar especificamente o HMGB1 acetilado em fluidos biológicos.
• A reatividade cruzada com HMGB1 de camundongo e rato foi indicada; no entanto, recomenda-se a validação no sistema de amostra relevante.

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