Anticorpo Policloonal de Coelho Anti-Aggrecan para WB, IHC, IF, ELISA - P16112

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do Aggrecan

• A proteína central do Aggrecan (AGC1, CSPG1, ACAN) é um grande proteoglicano de sulfato de condroitina e um componente estrutural principal da matriz extracelular da cartilagem.
• Ela medeia a resistência a forças compressivas na cartilagem articular e mantém a hidratação do tecido e as propriedades de suportar carga.
• O Aggrecan se liga avidamente ao ácido hialurônico por meio de seu domínio globular N-terminal, formando grandes agregados supramoleculares essenciais para a integridade da cartilagem.
• O Aggrecan é predominantemente expresso na cartilagem (PubMed:7524681) e também foi detectado em fibroblastos em nível proteico (PubMed:36213313). Referências relacionadas: PMID:7524681 PMID:36213313
• A proteína é secretada e localizada principalmente na matriz extracelular dos tecidos cartilaginosos.
• O Aggrecan pertence à família de proteoglicanos aggrecan/versican e contém domínios semelhantes a imunoglobulina, domínios de ligação e um domínio lectina do tipo C.
• Múltiplas isoformas são geradas por splicing alternativo, e a proteína central é intensamente glicosilada com cadeias laterais de sulfato de condroitina e sulfato de queratano.
• Modificações pós-traducionais incluem pontes dissulfeto, ligação de cálcio e glicosilação ligada a O; a proteína madura possui um domínio semelhante a EGF e motivos de repetição sushi.
• Mutações humanas no gene ACAN estão associadas a displasias esqueléticas e fenótipos de nanismo, destacando seu papel essencial no desenvolvimento e função da cartilagem.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 420–575 do aggrecan humano, uma região localizada entre os domínios G1 e G2; observe que este domínio interglobular pode ser suscetível à proteólise em lisados de tecido.
• Para Western blotting, o grande tamanho do aggrecan (~261 kDa) e sua extensa glicosilação podem exigir SDS-PAGE gradiente (por exemplo, 4–20%) e tempos de transferência prolongados; considere a desglicosilação para melhorar a resolução das bandas.
• Em imunohistoquímica (emblocagem em parafina), a recuperação de antígeno com condroitinase ABC ou hialuronidase pode desmascarar epítopos ao remover as cadeias laterais volumosas de GAG.
• Para ELISA, a cobertura com aggrecan recombinante ou extratos de cartilagem tratados com condroitinase pode aumentar a sensibilidade; a natureza policlonal do anticorpo pode fornecer sinal robusto em ensaios sanduíche.

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