Anticorpo policlonal de coelho anti-AK4 para WB, IP, ELISA - P27144

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da AK4

• A AK4, também conhecida como adenilato quinase 3-like ou fosfotransferase GTP:AMP, é uma enzima mitocondrial codificada pelo gene AK4 (GeneID: 205) que pertence à família das adenilato quinases.
• Funciona como uma quinase mitocondrial de fosfatos de nucleosídeos com ampla especificidade, mantendo a homeostase dos nucleotídeos celulares ao catalisar interconversões de fosfatos de nucleosídeos. Referências relacionadas: PMID:19073142 PMID:19766732 PMID:23416111
• A AK4 fosforila preferencialmente AMP em ADP utilizando ATP como doador de fosfato; também pode utilizar GTP como doador alternativo de fosfato para a fosforilação do AMP. Referências relacionadas: PMID:19766732
• In vitro, a AK4 apresenta uma especificidade de substrato mais ampla, fosforilando CMP, dAMP e dCMP, e utilizando GTP como doador alternativo. Referências relacionadas: PMID:19766732 PMID:23416111
• A enzima também possui atividade de difosfato quinase, gerando ATP, CTP, GTP, UTP, TTP, dATP, dCTP e dGTP a partir de seus respectivos difosfatos. Referências relacionadas: PMID:23416111
• A AK4 desempenha um papel fundamental na regulação dos níveis celulares de ATP ao modular a fosforilação e a ativação do sensor energético AMPK. Referências relacionadas: PMID:24767988 PMID:26980435
• Ela possui uma função protetora na resposta celular ao estresse oxidativo, contribuindo para a resistência mitocondrial. Referências relacionadas: PMID:19130895 PMID:23474458 PMID:26980435
• Subcelularmente, a AK4 está localizada na matriz mitocondrial, em consonância com seu papel no metabolismo mitocondrial de nucleotídeos.
• A expressão nos tecidos é mais elevada nos rins, moderada no coração e no fígado e baixa no cérebro, refletindo sua importância em tecidos com alta demanda energética.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde aos 223 aminoácidos N-terminais da AK4 humana, abrangendo o domínio conservado da adenilato quinase. Essa região é altamente homóloga entre humanos e camundongos, sustentando a reatividade cruzada observada.
• Para a análise por Western blot (WB), utilize lisados de tecido renal ou hepático como controles positivos. Considere uma diluição inicial de 1:500-1:2000 e valide com marcadores de peso molecular apropriados (~25 kDa).
• A imunoprecipitação (IP) pode se beneficiar de frações enriquecidas em mitocôndrias para aumentar a abundância do alvo. Otimize empiricamente a quantidade de anticorpo e as condições de incubação.
• Para aplicações de ELISA, faça a sensibilização com proteína AK4 recombinante como padrão e titule o anticorpo. A combinação com um anticorpo de detecção requer uma validação cuidadosa.
• Como a AK4 é uma proteína da matriz mitocondrial, considere o fracionamento subcelular ou colorações específicas de organelas para aumentar a especificidade do sinal.

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