Anticorpo monoclonal de coelho anti-AKT1/2 para WB, IHC, ELISA - P31749 / P31751

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de AKT1/2

• AKT1 é uma serina/treonina-proteína quinase pertencente à família AKT, que inclui AKT2 e AKT3. Atua como um regulador fundamental do metabolismo, da proliferação, da sobrevivência celular, do crescimento e da angiogênese (PubMed:11882383, PubMed:15526160, PubMed:15861136). Referências relacionadas: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136
• Fosforila uma ampla variedade de substratos a jusante, com mais de 100 candidatos identificados, embora a especificidade por isoforma não esteja bem definida para a maioria deles (PubMed:11882383, PubMed:15526160, PubMed:21432781). Referências relacionadas: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781
• Na sinalização da insulina, AKT1 promove a captação de glicose ao mediar a translocação do transportador GLUT4 para a superfície celular e regula a síntese de glicogênio ao inibir GSK3α e GSK3β (por similaridade).
• AKT1 promove a sobrevivência celular ao fosforilar e inibir fatores pró-apoptóticos: MAP3K5 em Ser-83 (PubMed:11154276), BAD (PubMed:10926925) e fatores de transcrição FOXO, levando ao seu sequestro citoplasmático (PubMed:10358075). Referências relacionadas: PMID:11154276, PMID:10926925, PMID:10358075
• É um componente central da via PI3K/AKT/mTOR, ativando o mTORC1 por meio da fosforilação de TSC2 (PubMed:12150915, PubMed:12172553) e modulando a atividade do mTORC2 por meio da fosforilação de MAPKAP1/SIN1 (por similaridade). Referências relacionadas: PMID:12150915, PMID:12172553
• AKT1 localiza-se no citoplasma, no núcleo, na membrana celular e no espaço intermembranar das mitocôndrias, refletindo seu envolvimento em diversos compartimentos de sinalização.
• É expressa ubiquitariamente nas células humanas, com expressão e ativação elevadas observadas em cânceres como os de próstata e de mama, nos quais a fosforilação de Tyr-176 aumenta durante a progressão.
• Modificações pós-traducionais, incluindo fosforilação, acetilação, ubiquitinação e glicosilação, regulam de forma precisa a atividade, a estabilidade e as interações de AKT1.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O peptídeo imunógeno abrange os aminoácidos 381-480 da AKT1 humana (P31749), uma região prevista como conservada na AKT2; portanto, o anticorpo pode reconhecer tanto AKT1 quanto AKT2. Considere verificar a especificidade por isoforma em seu sistema experimental.
• Para Western blot (WB), o anticorpo detecta uma banda de aproximadamente 56 kDa. Valide o peso molecular usando lisados de controle positivo (por exemplo, HeLa, NIH/3T3) e controles de carregamento apropriados.
• Na imunohistoquímica (IHC-P), assegure uma recuperação antigênica adequada e valide os padrões de coloração usando cortes de tecidos conhecidos por expressar AKT1/2, como tecidos de câncer de próstata ou de mama.
• Para ELISA, considere combiná-lo com um anticorpo de detecção direcionado a um epítopo diferente para o desenvolvimento de um ELISA sanduíche. Otimize as condições de revestimento e bloqueio.
• Como AKT1/2 são fosforiladas após a ativação, o anticorpo pode detectar AKT total; para estudos específicos de ativação, combine-o com anticorpos específicos para formas fosforiladas.

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