Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-ALG13 para WB, ELISA - Q9NP73

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da ALG13

• ALG13 é a subunidade catalítica do complexo UDP-N-acetilglucosamina transferase, também conhecida como asparagina-ligada à glicosilação 13 homóloga ou proteína 1 contendo domínio glicosiltransferase 28. Ela media o segundo passo da biossíntese do oligossacarídeo ligado ao dolichol na face citoplasmática do retículo endoplasmático.
• Junto com seu parceiro obrigatório ALG14, ALG13 forma um complexo dimérico que transfere uma N-acetilglucosamina (GlcNAc) ligada β1,4 do UDP-GlcNAc para o GlcNAc-pirofosfatodolicol, gerando difosfodolicol N,N′-diacetilquitobiosil. Este intermediário é subsequentemente alongado pela ALG1 e outras glicosiltransferases.
• O complexo ALG13/ALG14 está ancorado na membrana do retículo endoplasmático, onde o precursor do oligossacarídeo ligado ao dolichol é montado antes de ser translocado para o lúmen do RE para processamento posterior e eventual transferência para polipeptídeos nascentes.
• Embora anotada como uma potencial enzima multifuncional com base em motivos de sequência (domínios de protease de tiol, hidrolase), nenhuma atividade de glicosiltransferase ou deubiquitinase foi detectada para a ALG13 fora de seu papel na transferência de GlcNAc. Suas atividades bioquímicas adicionais, se houver, permanecem pouco caracterizadas.
• Mutações no gene ALG13 estão associadas ao distúrbio congênito da glicosilação tipo Is (CDG1S) e encefalopatias epilépticas da primeira infância (DEE36, EIEE36), refletindo a importância crítica desta enzima no neurodesenvolvimento normal e na N-glicosilação global de proteínas.
• O splicing alternativo gera múltiplos isoformas da ALG13, e a proteína está sujeita a ubiquitinação (via de conjugação Ubl), o que pode regular sua estabilidade ou função.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado é um peptídeo sintético abrangendo os resíduos 100–167 do ALG13 humano (isoforma NP_001311219.1). Este epítopo é conservado no ALG13 de camundongo, suportando a reatividade cruzada observada com amostras de camundongo.
• Para Western blotting, valide a especificidade do anticorpo incluindo controles positivos, como linhagens celulares humanas ou de camundongo conhecidas por expressar ALG13, e considere experimentos de knockdown por siRNA ou superexpressão para confirmar a banda de ~126 kDa.
• Para estudar o complexo funcional ALG13/ALG14, considere ensaios de co-imunoprecipitação ou de ligação de proximidade combinados com a detecção de ambas as subunidades.
• Em aplicações de ELISA, use proteína ALG13 recombinante ou o peptídeo imunizante como antígeno de revestimento para estabelecer curvas padrão, e faça a titulação do anticorpo apropriadamente para uma relação sinal-ruído ideal.
• Como a ALG13 é uma proteína associada à membrana, certifique-se de que os tampões de lise contenham detergentes adequados (por exemplo, 1% Triton X-100 ou NP-40) para solubilizar eficientemente a fração da membrana do RE.

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