Anticorpo policlonal de coelho anti-fosfatase alcalina (ALPL) para WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P05186

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da fosfatase alcalina (ALPL)

• A fosfatase alcalina, isoenzima não específica de tecido (ALPL), também conhecida como fosfatase alcalina hepática/óssea/renal, é codificada pelo gene ALPL e pertence à família das fosfatases alcalinas.
• Atua como uma hidrolase com ampla especificidade de substrato, desfosforilando compostos como o pirofosfato inorgânico (PPi), o 5′-fosfato de piridoxal (PLP) e a N-fosfocreatina. Referências relacionadas: PMID:12162492, PMID:2220817
• É essencial para a mineralização esquelética e dentária ao hidrolisar o PPi extracelular, um inibidor da mineralização, em fosfato, promovendo assim a formação de cristais de hidroxiapatita. Referências relacionadas: PMID:23688511, PMID:25982064
• Catalisa a desfosforilação do PLP em piridoxal, a forma transportável da vitamina B6, fundamental para a síntese de neurotransmissores no cérebro. Referências relacionadas: PMID:20049532, PMID:2220817
• Localiza-se na membrana celular por meio de uma âncora GPI e também se associa a vesículas extracelulares, à membrana mitocondrial e ao espaço intermembranar, mediando o metabolismo localizado de fosfato.
• É modificada pós-traducionalmente por glicosilação, ligações dissulfeto e sítios de ligação a metais, como zinco e magnésio, essenciais para sua atividade catalítica.
• Mutações no ALPL estão associadas à hipofosfatasia, uma doença óssea metabólica que reflete seu papel fundamental na biomineralização.
• Além disso, a ALPL pode desfosforilar produtos microbianos, como lipopolissacarídeos (LPS), sugerindo um papel na modulação das respostas imunes inatas. Referências relacionadas: PMID:28448526

Orientações experimentais e dicas técnicas

• Para Western blotting, considere uma diluição inicial de 1:500–1:2000 e valide em lisados de tecidos humanos, de camundongo ou de rato que expressem ALPL, como os de osso, fígado ou rim.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), a recuperação antigênica com tampão de citrato pode melhorar o sinal; teste em tecidos positivos conhecidos, como osteoblastos ou hepatócitos.
• Na imunofluorescência (IF-P), inclua uma permeabilização apropriada e valide a colocalização com marcadores de membrana ou de vesículas extracelulares.
• Para ELISA, combine com um anticorpo de detecção compatível e teste com proteína ALPL recombinante ou amostras biológicas que contenham atividade de fosfatase alcalina.
• O imunógeno abrange os aminoácidos 120–260, situando-se no domínio catalítico; o anticorpo pode reconhecer tanto as formas ligadas à membrana quanto as formas solúveis.
• Devido à alta homologia entre as espécies, espera-se reatividade cruzada com camundongo e rato, mas sempre valide no seu sistema de amostra específico.

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