Anticorpo policlonal de coelho anti-fosfatase alcalina (ALPL) para WB, IHC-P, ELISA - P05186

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da fosfatase alcalina (ALPL)

• A fosfatase alcalina, isoenzima não específica de tecido (ALPL), também conhecida como isoenzima hepática/óssea/renal, existe em múltiplas isoformas devido ao splicing alternativo e é amplamente expressa nos tecidos ósseo, hepático e renal.
• Desempenha um papel essencial na mineralização esquelética e dentária ao hidrolisar o difosfato extracelular (PPi), um potente inibidor da mineralização, em fosfato, promovendo assim a formação de cristais de hidroxiapatita e aumentando a concentração de fosfato inorgânico. Referências relacionadas: PMID:23688511 PMID:25982064
• Possui ampla especificidade de substrato, mas apenas alguns substratos são naturais, como o pirofosfato inorgânico (PPi), o 5'-fosfato de piridoxal (PLP) e a N-fosfocreatina. Referências relacionadas: PMID:12162492 PMID:2220817
• Catalisa a desfosforilação do 5'-fosfato de piridoxal (PLP) em piridoxal, a forma transportável da vitamina B6, essencial para a síntese de neurotransmissores no cérebro. Referências relacionadas: PMID:20049532 PMID:2220817
• É capaz de desfosforilar produtos microbianos, como lipopolissacarídeos (LPS) e poli-inosina:citosina (poli I:C), modulando potencialmente as respostas imunes inatas. Referências relacionadas: PMID:28448526
• Atua como um regulador essencial da termogênese adaptativa como parte do ciclo fútil da creatina nas mitocôndrias das células adiposas termogênicas, hidrolisando a N-fosfocreatina para dissipar energia sob a forma de calor sem realizar trabalho mecânico ou químico.
• A proteína é uma proteína de membrana glicosilada e ancorada por GPI que requer os cofatores zinco e magnésio; localiza-se na membrana celular, na membrana de vesículas extracelulares e na membrana mitocondrial, e mutações no gene ALPL causam hipofosfatasia.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 230-440 da ALPL humana, dentro da região central da proteína madura. Como a ALPL sofre splicing alternativo, certifique-se de que o epítopo esteja presente na isoforma de interesse.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto é de aproximadamente 57 kDa; no entanto, a glicosilação e outras modificações pós-traducionais podem fazer com que a banda observada migre para um peso molecular aparente mais alto. Utilize lisados de controle positivo de tecidos ósseo, hepático ou renal, ou linhagens celulares que superexpressem ALPL.
• Para imuno-histoquímica (IHC-P), otimize as condições de recuperação antigênica (por exemplo, recuperação de epítopos induzida por calor) e valide a especificidade da coloração utilizando controles de tecido deficientes em ALPL ou tecidos knockout, se disponíveis.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado como reagente de captura ou detecção; faça uma titulação das concentrações do anticorpo com proteína ALPL recombinante ou amostras naturais para determinar as diluições de trabalho ideais.
• Como ocorre com qualquer anticorpo policlonal, o desempenho pode variar entre os lotes; considere validar novos lotes no contexto específico do seu experimento.

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