Anticorpo monoclonal de coelho anti-ALKBH1 para WB, IP, IHC-P, ELISA - Q13686

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da ALKBH1

• ALKBH1 é uma dioxigenase de ácidos nucleicos que atua sobre DNA e tRNA, necessitando de oxigênio molecular, alfa-cetoglutarato e ferro. Referências relacionadas: PMID:18603530, PMID:27497299
• Atua principalmente como uma desmetilase de tRNA, removendo N1-metiladenina (m1A) dos tRNAs, especialmente na posição 58 (m1A58), regulando a iniciação e o alongamento da tradução em resposta à privação de glicose. Referências relacionadas: PMID:27745969
• Nas mitocôndrias, ALKBH1 oxida o mt-tRNA(Met) na citosina 34 para formar 5-formilcitosina (f5C), ampliando o reconhecimento de códons para AUA/AUG. Referências relacionadas: PMID:27497299
• Desmetila a N6-metiladenina (m6A) do DNA em elementos L1 de células-tronco embrionárias, potencialmente silenciando-os. Referências relacionadas: PMID:30017583, PMID:30392959
• Desmetila a modificação N3-metilcitidina (m3C) do mRNA. Referências relacionadas: PMID:31188562
• Também possui atividade de liase de DNA, introduzindo quebras de fita dupla em sítios abásicos independentemente do alfa-cetoglutarato e do ferro, formando um aduto covalente. Referências relacionadas: PMID:19959401, PMID:23577621
• Localização subcelular: núcleo e mitocôndrias.
• Expressa-se ubiquamente; pode desempenhar um papel na diferenciação da linhagem de trofoblastos placentários (por similaridade).

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aa 1–100), sugerindo o reconhecimento da proteína nativa de comprimento completo e, potencialmente, de determinadas isoformas que contenham essa região. Valide a especificidade no sistema de amostra relevante.
• Para Western blotting, espere uma banda de aproximadamente 44 kDa. Utilize controles de carregamento apropriados e confirme a reatividade cruzada com lisados humanos, de camundongo e de rato.
• Na imunoprecipitação (IP), recomenda-se o pré-esclarecimento e a otimização das proporções anticorpo:lisado para minimizar a ligação inespecífica.
• Para imunohistoquímica (IHC-P), as condições de recuperação antigênica podem precisar de otimização devido à localização nuclear/mitocondrial. Considere testar tanto a recuperação padrão com citrato quanto a baseada em EDTA.
• Em ELISA, combine com um anticorpo de detecção que reconheça um epítopo diferente caso esteja desenvolvendo um ensaio sanduíche e valide a linearidade e a sensibilidade com proteína recombinante ou padrões de peptídeo.

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