Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-ALKBH5 para WB, ELISA - Q6P6C2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ALKBH5

• O ALKBH5 catalisa a desmetilação oxidativa de m6A no RNA, uma reação dependente de oxigênio molecular, alfa-cetoglutarato e ferro, revertendo assim a modificação m6A no mRNA.
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• Através da sua atividade desmetilase, o ALKBH5 modula o processamento, tradução e exportação de mRNA, representando um regulador crítico do epitranscriptoma.
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• O ALKBH5 também é capaz de desmetilar N(6)-metiladenosina em DNA de fita simples in vitro, sugerindo um potencial de substrato mais amplo.
  Referências relacionadas: PMID:24616105
• Desempenha um papel essencial na espermatogênese, sendo necessário para as fases meiótica tardia e haploide; a desmetilação de m6A pelo ALKBH5 em espermatócitos e espermátides arredondados garante o splicing correto e a produção de mRNAs com 3'-UTR mais longos em células germinativas masculinas.
• O ALKBH5 participa da montagem de paraspeckles, uma organela nuclear sem membrana, através da separação de fase líquido-líquido, sendo a sua atividade desmetilase no RNA não codificante NEAT1 integral para este processo.
  Referências relacionadas: PMID:37369679 PMID:37474102
• Como regulador negativo do desenvolvimento de células T, o ALKBH5 inibe a proliferação de células T gama-delta desmetilando transcritos de JAG1 e NOTCH2, e suprime o recrutamento de células T reguladoras através da desestabilização do mRNA de CCL28.
• A nível subcelular, o ALKBH5 localiza-se nos speckles nucleares e no nucleoplasma, consistente com as suas funções no processamento de RNA e na dinâmica de corpos nucleares.
• A acetilação, fosforilação e conjugação de ubiquitina estão entre as modificações pós-traducionais anotadas para o ALKBH5, que podem regular a sua estabilidade e atividade.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno (aminoácidos 66-394 do ALKBH5 humano) abrange uma grande parte da proteína; considere verificar a especificidade em modelos de knockout ou knockdown para aplicações críticas.
• Para Western blotting, espera-se uma banda em aproximadamente 44 kDa; use lisados de tecidos com alta expressão de ALKBH5 (por exemplo, pulmão, testículo) como controles positivos.
• Em ELISA, otimize a concentração do antígeno de revestimento e a diluição do anticorpo para alcançar uma detecção linear e minimizar o fundo.
• Devido à localização nuclear da enzima, confirme se os protocolos de lise e extração são adequados ao preparar lisados para detecção.

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