Anticorpo Policloonal de Coelho Anti-AMPKa1/AMPKa2 para WB, IF/ICC, ELISA - Q13131 / P54646

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da AMPK alfa-1

• A AMPK alfa-1 é a subunidade catalítica da proteína quinase ativada por AMP (AMPK) heterotrimérica, um sensor de energia central que é ativado pelo aumento da razão AMP/ATP. Ela fosforila numerosos alvos a jusante para restaurar o balanço energético, estimulando vias catabólicas e inibindo processos anabólicos.
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• No metabolismo lipídico, ela fosforila diretamente e inativa a acetil-CoA carboxilase (ACACA) e a HMG-CoA redutase (HMGCR) para suprimir a síntese de ácidos graxos e colesterol. Ela também promove a lipólise fosforilando a colina quinase alfa (CHKA) nas gotículas de lipídios.
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• A quinase estimula a captação de glicose no músculo aumentando a translocação de SLC2A4/GLUT4 para a membrana plasmática, e modula a glicólise por meio da fosforilação de PFKFB2 e PFKFB3.
• A AMPK alfa-1 atua como regulador transcricional fosforilando fatores como CRTC2, FOXO3, p53/TP53 e histona H2B, acoplando assim o estado energético aos programas de expressão gênica adaptativa.
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• Sob limitação de nutrientes, ela suprime a sinalização de mTORC1 fosforilando TSC2 e RPTOR, e inicia a autofagia ativando ULK1. Ela também fosforila WDR24 e FNIP1 para ajustar a atividade de mTORC1 em resposta a estresse glicêmico e energético.
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• A proteína se localiza no citoplasma, núcleo e endossomos tardios, o que é consistente com suas diversas funções. Ela também regula a polaridade celular e fosforila um amplo conjunto de substratos, incluindo CFTR, EEF2K, CASP6 e ALDH7A1.
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Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno cobre uma região N-terminal conservada (aa 5–280) compartilhada por AMPKa1 e AMPKa2, o que suporta a reatividade cruzada com ortólogos de camundongo e rato, como indicado. Verifique a reatividade no seu sistema específico antes de estudos em larga escala.
• Para Western blot, espere bandas de aproximadamente 64 kDa (AMPKa1) e 65 kDa (AMPKa2). Otimize a carga de proteína e os agentes de bloqueio para resolver bandas próximas; inclua um lisado de controle positivo.
• Na imunofluorescência, a AMPK apresenta coloração tanto citoplasmática quanto nuclear. Teste diferentes protocolos de fixação (por exemplo, metanol vs. formaldeído) e inclua controles apropriados apenas com anticorpo secundário.
• Para ELISA, considere usar o peptídeo imunogênico ou lisados de células inteiras para gerar uma curva padrão. Faça a titulação do anticorpo para determinar as concentrações de trabalho ideais.

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