Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-APAF1 para WB e ELISA - O14727

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da APAF1

• A APAF1 (Fator 1 ativador de protease apoptótica), também conhecida como CED4 ou APAF-1, é codificada pelo gene APAF1 (KIAA0413) e existe em múltiplas isoformas devido ao splicing alternativo.
• A proteína funciona como componente central do apoptossomo, onde a APAF1 oligomérica media a ativação autoproteolítica dependente do citocromo c do pró-caspase-9, ativando subsequentemente a caspase-3 para executar a apoptose; esse processo requer a ligação de ATP.
• APAF1 é uma proteína multi-domínio que contém um domínio de recrutamento de caspase N-terminal (CARD), um domínio central de ligação a nucleotídeos e oligomerização (NOD) e regiões de repetição WD40 C-terminais essenciais para a ligação do citocromo c.
• Subcelularmente, a APAF1 reside predominantemente no citoplasma em condições normais e, após a indução da apoptose, ela se transloca para o complexo do apoptossomo.
• A expressão é ubíqua, com os níveis mais altos detectados no baço adulto, leucócitos do sangue periférico, cérebro fetal, rim e pulmão; a isoforma 1 é encontrada especificamente no coração, rim e fígado.
• A proteína está sujeita à ligação de ATP/dATP e provavelmente à regulação mediada por cálcio, como indicado pelas associações de palavras-chave, e apresenta repetições WD essenciais para interações proteína-proteína.
• Palavras-chave: Estrutura 3D, Splicing alternativo, Apoptose, Ligação a ATP, Cálcio, Citoplasma, Sequenciamento direto de proteínas, Ligação a nucleotídeos, Identificação proteômica, Proteoma de referência, Repetição, Repetição WD.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 470-600 da APAF1 humana (região NOD central), garantindo a detecção de variantes de comprimento total e truncadas, mas a especificidade deve ser verificada nos modelos celulares relevantes.
• Para Western blotting, considere que a APAF1 migra em múltiplos pesos moleculares (38-142 kDa) devido à diversidade de isoformas e clivagem pela caspase; o padrão de bandas pode variar conforme o tipo de célula e os estímulos apoptóticos.
• Aplicações de ELISA podem ser desenvolvidas usando uma curva padrão de APAF1 recombinante; inclua controles positivos (por exemplo, lisados de Jurkat tratados com estaurosporina) e negativos apropriados para validar a especificidade do ensaio.
• A reatividade cruzada com a APAF1 de camundongo é esperada com base na homologia de sequência, mas a confirmação empírica em tecidos ou linhas celulares de camundongo é recomendada.
• A otimização da diluição do anticorpo, das condições de incubação e dos reagentes de detecção é aconselhada para cada sistema experimental.

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