Anticorpo policlonal de coelho anti-APOBEC3G para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q9HC16

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da APOBEC3G

• A APOBEC3G (A3G/ARCD/ARP-9/CEM15) é uma citidina desaminase que inibe a replicação de retrovírus e a mobilidade de retrotransposons por meio de mecanismos dependentes e independentes da atividade desaminase. Referências relacionadas: PMID:12808465, PMID:16527742, PMID:17121840

• Ela apresenta potente atividade antiviral contra o HIV-1 deficiente em Vif, atuando após a penetração do nucleocapsídeo viral ao desaminar citosina em uracila no DNA viral da fita negativa, resultando em hipermutações de G para A que comprometem o genoma proviral. Referências relacionadas: PMID:12167863, PMID:12859895, PMID:14557625, PMID:12808465, PMID:12808466, PMID:12809610

• A APOBEC3G tem como alvo seletivamente o DNA de fita simples e não desamina o DNA de fita dupla nem o RNA. Referências relacionadas: PMID:12808465, PMID:12809610, PMID:12970355

• Além do HIV-1, ela restringe uma ampla variedade de vírus, incluindo SIVs, HBV, EIAV, XMRV e SFV. Referências relacionadas: PMID:15031497, PMID:16378963, PMID:18448976

• A APOBEC3G localiza-se predominantemente no citoplasma e nos corpos P, mas também pode ser encontrada no núcleo; sua retenção citoplasmática está associada à sua função antiviral.

• A expressão tecidual é observada no baço, nos testículos, no ovário, nos leucócitos do sangue periférico e nos linfócitos CD4+, sendo fortemente modulada pelo estado de ativação/diferenciação das células-alvo, o que se correlaciona com a suscetibilidade ao HIV-1.

• A proteína contém dois domínios de desaminase coordenados por zinco e sofre fosforilação, ubiquitinação e outras modificações pós-traducionais que regulam sua atividade e estabilidade.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno (aminoácidos 244–257) está localizado em uma região conservada da APOBEC3G humana, o que pode explicar a reatividade cruzada relatada com os ortólogos de camundongo e rato.
• Para western blotting (WB), o peso molecular previsto é de aproximadamente 46 kDa; no entanto, modificações pós-traducionais ou fatores específicos da amostra podem levar ao aparecimento de bandas adicionais. Valide a especificidade do anticorpo utilizando lisados de controle positivo e negativo apropriados.
• Para IHC-P e IF/ICC, otimize os métodos de recuperação antigênica e as diluições do anticorpo para o tecido ou tipo celular específico. Considere utilizar linhagens celulares permissivas e não permissivas ao HIV-1 como controles para confirmar a relevância funcional.
• Em aplicações de ELISA, a detecção combinada com um anticorpo de captura pode aumentar a sensibilidade do ensaio; faça uma titulação do anticorpo para determinar as concentrações de trabalho ideais.

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