Anticorpo Monoclonal Anti-APOE para WB, IF/ICC, ELISA - P02649

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da APOE

• A APOE (Apolipoproteína E) é um componente central das lipoproteínas plasmáticas, funcionando principalmente no transporte lipídico mediado por lipoproteínas entre órgãos via plasma e fluidos intersticiais, e está envolvida na produção, conversão e depuração de partículas de quilomícrons, VLDL, IDL e HDL (PubMed:14754908, PubMed:1911868, PubMed:6860692, PubMed:1917954). Referências relacionadas: PMID:14754908, PMID:1911868, PMID:6860692, PMID:1917954

• A APOE liga-se a receptores celulares, incluindo LDLR, LRP1, LRP2, LRP8 e VLDLR, para mediar a captação de partículas de lipoproteínas contendo APOE, e também possui atividade de ligação à heparina que suporta a captura na superfície celular via proteoglicanos de sulfato de heparano (PubMed:12950167, PubMed:1530612, PubMed:1917954, PubMed:23676495, PubMed:7635945, PubMed:9395455). Referências relacionadas: PMID:12950167, PMID:1530612, PMID:1917954, PMID:23676495, PMID:7635945, PMID:9395455

• Desempenha um papel crítico no transporte reverso de colesterol, participando na biogênese de HDL mediada por ABCA1 e mediando a captação hepática de HDL, contribuindo assim para a homeostase do colesterol (PubMed:14754908, PubMed:23620513, PubMed:9395455). Referências relacionadas: PMID:14754908, PMID:23620513, PMID:9395455

• No sistema nervoso central, a APOE é importante para o transporte lipídico, regula a sobrevivência e ramificação dos neurônios, e pode influenciar a patogênese da doença de Alzheimer através da regulação transcricional dependente de receptores da APP (PubMed:25173806, PubMed:8939961, PubMed:28111074). Referências relacionadas: PMID:25173806, PMID:8939961, PMID:28111074

• A APOE é secretada e encontrada no espaço extracelular, matriz extracelular e corpos multivesiculares endossomais; é produzida principalmente por hepatócitos do fígado, mas também no cérebro (astrócitos, neurônios), glândula adrenal, rim, baço e tecido adiposo (PubMed:25173806, PubMed:10027417, PubMed:3115992). Referências relacionadas: PMID:25173806, PMID:10027417, PMID:3115992

• A APOE está envolvida em respostas imunes inatas e adaptativas, ligando-se ao receptor de células imunes LILRB4 e controlando a sobrevivência de células supressoras de origem mieloide; também participa na infecção por HCV interagindo com a glicoproteína do envelope viral E2 (PubMed:30333625, PubMed:25122793, PubMed:29695434). Referências relacionadas: PMID:30333625, PMID:25122793, PMID:29695434

• Modificações pós-traducionais incluem glicosilação, fosforilação e oxidação; é suscetível à glicação, e variantes estão associadas à hiperlipidemia e à doença de Alzheimer.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno é uma proteína recombinante abrangendo os aminoácidos 19-317 da APOE humana, o que cobre a maior parte da proteína madura, incluindo a região de ligação ao receptor. Este desenho pode permitir que o anticorpo reconheça tanto as conformações de APOE livres de lípidos quanto ligadas a lípidos.
• Para Western blotting, a APOE é detectada com um peso molecular aparente de ~36 kDa; considere validar em amostras de fígado, cérebro ou plasma onde a APOE é altamente expressa. Use condições redutoras apropriadas, pois a APOE pode formar complexos ligados por dissulfeto.
• Na imunofluorescência/ICC, note que a APOE é principalmente secretada; a otimização da fixação e permeabilização pode ser necessária para visualizar os pools intracelulares, e a co-coloração com marcadores de organelas (por exemplo, RE, Golgi ou endossomas) é recomendada.
• Para ELISA, a APOE pode ser quantificada em soro/plasma ou sobrenadantes de cultura celular; no entanto, os altos níveis endógenos no soro podem exigir otimização de diluição e geração cuidadosa da curva padrão.
• Dado o papel dos isoformas da APOE na doença, os pesquisadores podem considerar a validação específica do isoforma se o anticorpo reconhecer epítopos comuns; este anticorpo é produzido contra a sequência de referência (NP_000032.1) que corresponde ao isoforma APOE3.

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