Anti-APTX Anticorpo Policlonal de Coelho para WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q7Z2E3

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da APTX

• A Aprataxina (APTX), também conhecida como proteína semelhante ao triade de histidina com domínio forkhead-associated (FHA-HIT), é uma proteína de ligação ao DNA envolvida no reparo de quebras de fita simples de DNA, reparo de quebras de fita dupla de DNA e reparo de excisão de base (PubMed:15044383, PubMed:15380105, PubMed:16964241). Ela resolve intermediários abortivos de ligação de DNA catalisando a liberação de grupos adenilato das extremidades 5'-fosfato, gerando extremidades 5'-fosfato que podem ser religadas com eficiência (PubMed:16964241, PubMed:17276982, PubMed:24362567). Referências relacionadas: PMID:15044383, PMID:15380105, PMID:16964241, PMID:17276982, PMID:24362567

• A APTX também hidrolisa 5'-monofosforamidato de adenosina (AMP-NH(2)) e tetrafosfato de diadenosina (AppppA), embora com menor atividade catalítica (PubMed:16547001). Apresenta atividade específica mais elevada com adenosina ligada em 5' (AppDNA) em comparação com aductos de DNA de guanosina ou inosina ligados em 3' (Por similaridade). Referências relacionadas: PMID:16547001

• A proteína localiza-se predominantemente no núcleo, incluindo o nucleoplasma e o nucléolo, mas também é detectada no citoplasma.

• A APTX contém um domínio dedo de zinco e um domínio FHA, exigindo a ligação de íons metálicos para a atividade. É sujeita a fosforilação (palavra-chave de fosfoproteína).

• A isoforma 1 é altamente expressa no córtex cerebral e cerebelo em relação à isoforma 2. A APTX é amplamente expressa em tecidos como fígado, rim, linfonodo, músculo esquelético, fibroblastos, linfócitos e pâncreas (PubMed:14755728, PubMed:11586299, PubMed:11586300, PubMed:15276230). Referências relacionadas: PMID:14755728, PMID:11586299, PMID:11586300, PMID:15276230

• Mutações na APTX causam ataxia com apraxia oculomotora tipo 1 (AOA1), um distúrbio neurodegenerativo, destacando seu papel essencial no reparo de DNA neuronal.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno (proteína recombinante que abrange os aminoácidos 93-342 da APTX humana) cobre o domínio catalítico HIT; portanto, o anticorpo policlonal resultante pode reconhecer ambas as isoformas. Verifique a detecção da isoforma em seu sistema de amostra.
• Para Western blot (WB), o peso molecular previsto é de 41 kDa, mas modificações pós-traducionais podem causar leves deslocamentos. Use controles positivos apropriados (por exemplo, lisados de HeLa, HEK293) e valide com knockdown por siRNA, se possível.
• Em imunofluorescência (IF/ICC), espere coloração nuclear com possível enriquecimento nucleolar. Co-cor com um marcador nucleolar (por exemplo, fibrilarina) para confirmar a localização.
• Para imunoprecipitação (IP), o anticorpo pode capturar a APTX e suas proteínas interatuantes envolvidas no reparo de DNA. Otimize as condições do tampão de lise (por exemplo, concentração de sal, detergente) para preservar os complexos proteicos.
• Aplicações de ELISA podem ser desenvolvidas usando a proteína APTX recombinante ou um peptídeo como padrão. Titule o anticorpo para uma relação ideal sinal-ruído.
• Este anticorpo é validado para reatividade humana; a reatividade cruzada com outras espécies não foi determinada. Se usar amostras não humanas, recomenda-se o alinhamento de sequência da região do imunógeno.

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