Anticorpo Monoclonal Anti-ARF5 para WB, IF/ICC, ELISA - P84085

Especificações e Parâmetros Essenciais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ARF5

• O fator 5 de ADP-ribosilação (ARF5) é uma pequena proteína de ligação ao GTP que alterna entre os estados ativo ligado ao GTP e inativo ligado ao GDP, funcionando como um interruptor molecular no tráfego intracelular.
• O ARF5 desempenha um papel fundamental no tráfego de proteínas, contribuindo para a formação e o desnudamento de vesículas no aparelho de Golgi.
• Ele regula a atividade do mTORC1 ao promover o recrutamento do complexo mTORC1 para as ondulações da membrana plasmática, facilitando a ativação por meio da via de sinalização PI3K/Akt. Referências relacionadas: PMID:36735494
• O ARF5 atua como um respondedor precoce a danos lisossômicos e participa das vias de controle de qualidade lisossômica. Referências relacionadas: PMID:41293316
• Durante infecções microbianas, o ARF5 funciona como um ativador alostérico da subunidade catalítica da toxina da cólera, uma ADP-ribosiltransferase.
• O ARF5 está localizado em vários compartimentos celulares, incluindo o aparelho de Golgi (membrana da rede trans-Golgi), a membrana celular, o citoplasma (região perinuclear) e a membrana lisossômica, refletindo suas funções dinâmicas no tráfego celular.
• É uma lipoproteína miristoilada, com um grupo miristoíla ligado ao seu terminal N, o que provavelmente facilita sua associação à membrana.
• A proteína possui um peso molecular calculado de aproximadamente 20,5 kDa e pertence à família ARF de pequenas GTPases.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 81–180 do ARF5 humano, região conservada entre humano, camundongo e rato; portanto, o anticorpo pode detectar ARF5 nessas espécies, mas a reatividade cruzada deve ser validada no sistema experimental relevante.
• Para Western blot (WB), o ARF5 é previsto em aproximadamente 21 kDa; considere o uso de controles positivos adequados (por exemplo, lisados de células HeLa e HEK293) e confirme a especificidade da banda por meio de validação com siRNA ou knockout.
• Na imunofluorescência (IF/ICC), o ARF5 se localiza no Golgi e em vesículas citoplasmáticas; as condições de fixação e permeabilização devem ser otimizadas para marcadores do Golgi, sendo recomendada a co-coloração com marcadores de organelas.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado como reagente de detecção ou captura; pode ser necessário combiná-lo com um par de anticorpos adequado contra ARF5 para configurações de ELISA sanduíche.
• Como o ARF5 é uma proteína associada à membrana e miristoilada, tampões de extração contendo detergentes suaves podem melhorar a solubilidade sem comprometer o reconhecimento do epítopo.

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