Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-ARF5 para WB, ELISA - P84085

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ARF5

• ARF5 é um membro da família das pequenas GTPases do fator de ribosilação ADP (ARF), que desempenham papéis essenciais no tráfego vesicular intracelular e na estrutura das organelas.
• Ele funciona como uma proteína de ligação a GTP que contribui para a brotagem e desrevestimento de vesículas no aparelho de Golgi, mediando o transporte de proteínas entre o retículo endoplasmático e o Golgi.
• ARF5 regula a atividade de mTORC1 ao promover o recrutamento de mTORC1 para os sulcos da membrana plasmática, facilitando assim sua ativação através da via de sinalização PI3K/Akt. Referências relacionadas: PMID:36735494
• Ele atua como respondedor precoce ao dano lisossomal e participa das vias de controle de qualidade lisossomal, destacando seu papel na manutenção da homeostase celular. Referências relacionadas: PMID:41293316
• Durante a infecção microbiana, ARF5 funciona como ativador alostérico da subunidade catalítica da toxina da cólera, uma ADP-ribosiltransferase, indicando seu envolvimento nas interações hospedeiro-patógeno.
• A proteína se localiza em vários compartimentos celulares, incluindo a membrana celular, o aparelho de Golgi, a membrana da rede trans-Golgi, o citoplasma (região perinuclear) e a membrana do lisossomo.
• ARF5 é caracterizado por modificações pós-traducionais como a N-miristoilação, que o ancora às membranas, e contém domínios conservados de ligação a GTP essenciais para suas funções regulatórias.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aminoácidos 1-180) do ARF5 humano. Esta região inclui o domínio conservado de ligação a GTP e provavelmente detecta o ARF5 de comprimento completo. Considere usar um lisado de controle positivo de HeLa, HEK293 ou outras linhas celulares humanas que expressam ARF5 para validação no Western blot.
• Para Western blot, o peso molecular previsto do ARF5 é de aproximadamente 21 kDa. Use condições de SDS-PAGE redutor e um tampão de bloqueio padrão. Otimize empiricamente a diluição do anticorpo primário entre 1:500 e 1:2000, e inclua um anticorpo secundário apropriado para a espécie.
• O anticorpo é adequado para aplicações em ELISA. Para ELISA direto ou sanduíche, titule o anticorpo contra a proteína recombinante usada como imunógeno ou contra lisados celulares para determinar as concentrações ótimas de revestimento e detecção.
• A reatividade cruzada é relatada para ARF5 humano, de camundongo e de rato. Ao trabalhar com amostras de camundongo ou rato, valide o anticorpo no seu sistema de modelo específico, pois as modificações pós-traducionais ou os níveis de expressão proteica podem variar.

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