Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-Dimetil-Assimétrico-Histona H3-R17 (Q16695/P68431) para WB, IF/ICC, ELISA

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Dimetil-Assimétrica-Histona H3-R17

• A histona H3 é um componente central do nucleossomo, envolvendo o DNA em cromatina e desempenhando um papel central na regulação da transcrição, reparo de DNA, replicação de DNA e estabilidade cromossômica. Modificações pós-traducionais (PTMs) de histonas, coletivamente conhecidas como código de histonas, governam a acessibilidade e função da cromatina.
• A dimetilação assimétrica da histona H3 na arginina 17 (H3R17me2a; correspondente à posição 18 na sequência canônica da UniProt) é catalisada pela proteína arginina metiltransferase CARM1 (coativador associado à arginina metiltransferase 1). Esta modificação está associada à ativação transcricional e recrutamento de complexos coativadores.
• Tanto a histona H3.1 canônica (codificada por múltiplos genes como H3C1, H3C2, etc.; UniProt P68431) quanto a variante específica de testículo H3.1t (H3-4; UniProt Q16695) carregam esta modificação. H3.1t é expressa em células testiculares, enquanto H3.1 é expressa ubiquamente em células somáticas.
• A histona H3 localiza-se no núcleo e é encontrada predominantemente em nucleossomos ao longo dos cromossomos. A cauda N-terminal, onde R17 está localizada, projeta-se do núcleo do nucleossomo e é um ponto crítico para numerosas PTMs que regulam a expressão gênica.
• O imunógeno peptídico sintético corresponde aos primeiros 100 aminoácidos da histona H3 humana, uma região altamente conservada entre eucariotos, o que explica a ampla reatividade cruzada prevista deste anticorpo. Referências relacionadas:
• PMID:15345777
• PMID:15471871
• PMID:16497732
• UniProt Q16695
• UniProt P68431

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• Para Western blotting (WB), são recomendadas histonas extraídas por ácido ou lisados de células inteiras de linhagens celulares relevantes. O peso molecular esperado da histona H3 é de aproximadamente 15 kDa. Considere o uso de ensaios de competição com peptídeos ou amostras com CARM1 nocauteado para confirmar a especificidade de detecção para a modificação dimetil-R17 assimétrica.
• Em imunofluorescência/immunocytochemistry (IF/ICC), as condições de fixação e permeabilização influenciam significativamente a acessibilidade do epítopo. A fixação com metanol frequentemente melhora o sinal nuclear; otimize a diluição do anticorpo e as etapas de bloqueio para minimizar o fundo.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado com peptídeos sintéticos para distinguir a dimetil-R17 assimétrica de peptídeos dimetilados simétricos ou não modificados de H3. Inclua controles apropriados para garantir a especificidade.
• Devido à ampla reatividade cruzada prevista, valide o anticorpo em sua espécie e modelo de tecido específicos antes de aplicar em experimentos críticos.
• Este anticorpo é membro da categoria de Anticorpos Metilados e é adequado para pesquisa epigenética. Embora não validado aqui para imunoprecipitação de cromatina (ChIP) ou análise multiplexada, ele pode ser integrado com outros reagentes específicos de modificações de histonas para tais aplicações com otimização apropriada.

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