Anticorpo Policlonal Anti-ATG12 para WB, IF/ICC, ELISA - O94817

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da ATG12

• A proteína semelhante à ubiquitina ATG12 (também conhecida como semelhante à APG12) é um componente essencial da via de autofagia, sendo indispensável para a formação do autofagossomo.
• A ATG12 se conjuga com a ATG5 por meio de um sistema semelhante à ubiquitina que envolve ATG7 (semelhante à E1) e ATG10 (semelhante à E2). O conjugado ATG12-ATG5 atua então como uma enzima semelhante à E3, promovendo a lipidização das proteínas da família ATG8 e sua associação à membrana.
• O complexo ATG12-ATG5, juntamente com ATG16L1, é necessário para o recrutamento de LRRK2 aos lisossomos sob estresse e para a indução da atividade quinase de LRRK2 em resposta ao estresse lisossomal (por similaridade).
• Subcelularmente, a ATG12 está localizada no citoplasma e na membrana da estrutura pré-autofagossomal, de acordo com seu papel nas etapas iniciais da autofagia.
• A ATG12 é expressa de forma ubíqua nos tecidos humanos, refletindo seu papel fundamental na homeostase celular.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação e a formação de uma ligação isopeptídica com ATG5. O splicing alternativo produz múltiplas isoformas, e uma estrutura tridimensional foi determinada (Identificação por proteômica; Proteoma de referência; Via de conjugação Ubl).
• Na infecção viral, a ATG12 atua como um fator pró-viral: o conjugado ATG5-ATG12 regula negativamente a resposta imune antiviral inata ao prejudicar a produção de IFN do tipo I após a infecção por VSV; também é necessário para a tradução do RNA de HCV que entra na célula e para o início da replicação, embora não seja necessário para a infecção estabelecida. Referências relacionadas: PMID:17709747 PMID:19666601

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético da região N-terminal (aa 1–100) da ATG12 humana. Considere verificar a acessibilidade do epítopo no seu tipo de amostra; a recuperação antigênica padrão pode não ser necessária para WB.
• Na transferência Western, espere uma banda em aproximadamente 15 kDa correspondente à ATG12 monomérica. O conjugado ATG12-ATG5 pode aparecer com peso molecular mais elevado em condições não redutoras; inclua controles apropriados para distinguir as formas.
• Para imunofluorescência/ICC, o padrão de coloração esperado é citoplasmático e pontilhado (estruturas pré-autofagossomais). A coloração conjunta com marcadores de autofagia (por exemplo, LC3) pode ajudar a confirmar a especificidade.
• Este anticorpo policlonal apresenta reatividade cruzada com ATG12 de camundongo e rato, sendo adequado para estudos entre espécies. Sempre valide o anticorpo no contexto da espécie relevante.
• Assim como ocorre com todos os anticorpos policlonais, é possível haver variabilidade entre lotes. Inclua controles positivos e negativos em cada experimento e considere realizar uma titulação para obter a melhor relação sinal-ruído.

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