Anticorpo Policlonado de Coelho Anti-ATG4A para WB, IF/ICC, ELISA - Q8WYN0

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da ATG4A

• ATG4A é uma cisteína protease essencial para a autofagia, mediando tanto a ativação proteolítica quanto a delipidação das proteínas da família ATG8. Referências relacionadas: PMID:12473658, PMID:15169837, PMID:17347651

• A atividade protease da ATG4A cliva o resíduo C-terminal das proteínas ATG8 (incluindo MAP1LC3A, GABARAP, GABARAPL2) para expor uma glicina, necessária para sua conjugação com PE e direcionamento à membrana durante a autofagia. Referências relacionadas: PMID:12473658, PMID:15169837, PMID:17347651

• ATG4A catalisa a delipidação de proteínas da família ATG8 conjugadas com PE, com atividade de delipidação mais forte em comparação com a ATG4B, contribuindo assim para a reciclagem das proteínas ATG8. Referências relacionadas: PMID:29458288, PMID:33909989

• Ela funciona como uma enzima semelhante a desubiquitinante para neutralizar a ATG4ilação, clivando ATG8 de conjugados como a ATG3. Referências relacionadas: PMID:31315929, PMID:33773106

• Independentemente de sua atividade protease, a ATG4A regula a mitofagia controlando o tráfego de ATG9A para as mitocôndrias e facilitando os contatos entre o fagoforo e o retículo endoplasmático durante a transferência de lipídios. Referências relacionadas: PMID:33773106

• ATG4A se localiza no citoplasma, o que é consistente com seu papel na autofagia.

• O gene ATG4A sofre splicing alternativo, produzindo múltiplas isoformas, e foi identificado em estudos de proteômica.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 210–398 da ATG4A humana, uma região que pode incluir domínios funcionalmente relevantes; a preservação do epítopo e a homologia entre espécies devem ser consideradas ao interpretar os dados de reatividade cruzada.
• Para Western blotting em condições redutoras, espera-se uma banda próxima a 45 kDa; use lisados celulares ou teciduais apropriados com expressão confirmada de ATG4A como controle positivo.
• Na imunofluorescência ou imunocitoquímica, a localização citoplasmática da ATG4A deve ser detectável; otimize os protocolos de fixação e permeabilização para o tipo celular específico.
• Aplicações em ELISA podem ser desenvolvidas usando proteína ATG4A recombinante ou fragmentos de peptídeo; as condições do ensaio podem exigir otimização empírica.
• A reatividade cruzada com ortólogos de camundongo e rato é declarada; valide a especificidade na espécie alvo usando modelos de knockout ou knockdown quando possível.

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