Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-ATG4B para WB, IF, ELISA - Q9Y4P1

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ATG4B

• O ATG4B (também conhecido como APG4B, AUTL1, autofagina-1) é uma cisteína protease chave que regula a autofagia ao mediar o processamento proteolítico e a delipidação das proteínas da família ATG8, essencial para a macroautofagia, autofagia não canônica e mitofagia. Referências relacionadas: PMID:15169837, PMID:15187094, PMID:17347651, PMID:33773106, PMID:33909989

• Ele cliva os aminoácidos terminais C dos homólogos do ATG8 (MAP1LC3A/B/C, GABARAP, GABARAPL1/2) para expor uma glicina conservada, um pré-requisito para sua conjugação com fosfatidiletanolamina (PE) e inserção nas membranas autofagossômicas. Referências relacionadas: PMID:15169837, PMID:15187094, PMID:17347651

• O ATG4B também atua como uma enzima delipidante, desconjugando o PE das proteínas ATG8 para facilitar sua reciclagem; adicionalmente, processa proteínas ATG8 em estruturas de membrana única durante a autofagia não canônica. Referências relacionadas: PMID:15187094, PMID:19322194, PMID:29458288, PMID:33909989

• Na mitofagia, o ATG4B promove o crescimento do forófago independentemente de sua atividade protease, regulando o tráfego de ATG9A para as mitocôndrias e permitindo contatos RE-forófago para transferência de lipídios. Referências relacionadas: PMID:33773106

• Entre os quatro parálogos de ATG4 de mamíferos (ATG4A–D), o ATG4B é a principal protease para ativação do ATG8, mas apresenta atividade de delipidação relativamente fraca em comparação com ATG4A e ATG4D. Referências relacionadas: PMID:29458288, PMID:30661429

• Subcelularmente, o ATG4B localiza-se no citoplasma, citosol, autofagossomos, retículo endoplasmático e mitocôndrias, consistente com seu papel multifacetado na autofagia e vias relacionadas.

• Modificações pós-traducionais, incluindo acetilação, fosforilação, S-nitrosilação e glicação, foram relatadas, potencialmente regulando sua atividade enzimática e distribuição subcelular.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde a um peptídeo dentro dos resíduos 200-300 do ATG4B humano, uma região localizada no domínio catalítico. A reatividade do anticorpo pode ser influenciada por modificações pós-traducionais ou estados conformacionais.
• Para Western blotting, o ATG4B migra em aproximadamente 44 kDa. Os níveis endógenos podem variar; considere o uso de indutores de autofagia (por exemplo, privação, rapamicina) para melhorar a detecção.
• Em aplicações de imunofluorescência, o ATG4B mostra uma distribuição citoplasmática pontilhada que pode colocalizar com marcadores de autofagossomo (por exemplo, LC3) e marcadores mitocondriais em condições de mitofagia. Valide a especificidade em linhagens celulares knockout.
• Relatou-se que o anticorpo reage cruzadamente com ATG4B de camundongo e rato; no entanto, o alinhamento de sequência da região do imunógeno deve ser verificado para outras espécies.
• Aplicações de ELISA podem ser usadas para quantificação; considere o formato de ELISA sanduíche com um par de anticorpos correspondente.

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