Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-ATG4D para WB, IF/ICC, ELISA - Q86TL0

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ATG4D

• O ATG4D é uma protease de cisteína que desempenha um papel fundamental na autofagia ao medir tanto a ativação proteolítica quanto a deslipidação das proteínas da família ATG8. Ele cliva o aminoácido C-terminal do MAP1LC3 e do GABARAPL2 para expor um resíduo de glicina essencial para a conjugação com a fosfatidiletanolamina (PE) e inserção na membrana. Referências relacionadas: PMID:21177865
• Além da ativação proteolítica, o ATG4D catalisa a deslipidação das proteínas ATG8 conjugadas com PE durante a macroautofagia e das proteínas ATG8 conjugadas com fosfatidilserina (PS) na autofagia não canônica, atuando como a principal enzima de deslipidação entre os membros da família ATG4. Referências relacionadas: PMID:29458288, PMID:33909989
• O ATG4D está envolvido no crescimento do forófago durante a mitofagia de forma independente da sua atividade de protease, regulando o tráfego de ATG9A para as mitocôndrias e promovendo contatos entre forófago e retículo endoplasmático durante a transferência de lipídios. Referências relacionadas: PMID:33773106
• A proteína atua como um regulador da autofagia que liga a disfunção mitocondrial à apoptose; a sua importação mitocondrial durante o estresse celular e a diferenciação influencia a fisiologia mitocondrial, os níveis de ROS, a mitofagia e a viabilidade celular.
• A nível subcelular, o ATG4D localiza-se no citoplasma e na matriz mitocondrial, consistente com os seus papéis duplos na autofagia e regulação mitocondrial.
• É amplamente expresso, com expressão notável nos testículos, e sofre splicing alternativo. As modificações pós-traducionais incluem fosforilação.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aminoácidos 1-230) do ATG4D humano. Ao trabalhar com amostras, considere que esta região pode ser conservada entre isoformas ou espécies, e valide os padrões de bandas em conformidade.
• Para western blotting (WB), o peso molecular previsto é de aproximadamente 53 kDa, mas o ATG4D endógeno pode sofrer processamento proteolítico ou modificação; valide os tamanhos das bandas usando controles positivos apropriados e lisados de células humanas ou de camundongo.
• Em imunofluorescência/imunocitoquímica (IF/ICC), avalie os padrões de coloração citoplasmática e mitocondrial. A otimização das condições de fixação e permeabilização pode ser necessária para detectar o ATG4D localizado nas mitocôndrias.
• Para aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser usado para a detecção de ATG4D recombinante ou endógeno; estabeleça curvas padrão com concentrações conhecidas de antígeno e considere a reatividade cruzada com outros membros da família ATG4 relacionados se estiver fazendo multiplexação.

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