Anticorpo Monoclonal Anti-ATG5 para WB, IF-P, IHC-P, IP, ELISA - Q9H1Y0

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ATG5

• A proteína 5 da autofagia (ATG5), também conhecida como APG5-like, ASP ou hAPG5, é uma proteína chave relacionada à autofagia codificada pelo gene ATG5 (ID do Gene: 9474) em humanos.
• O ATG5 é essencial para a formação de vesículas autofágicas. Ele se conjuga com ATG12 por meio de um sistema similar à ubiquitina envolvendo ATG7 (tipo E1) e ATG10 (tipo E2). O conjugado ATG12-ATG5 atua como uma enzima do tipo E3 para a lipidacao de proteínas da família ATG8, facilitando sua associação com as membranas das vesículas.
• O ATG5 desempenha um papel crítico no controle de qualidade mitocondrial após dano oxidativo, contribuindo para a longevidade celular, e está envolvido no desenvolvimento de linfócitos, onde é essencial para a sobrevivência e proliferação de células B e T.
• A proteína é necessária para o processamento e apresentação ótimos de antígenos via MHC II, manutenção da morfologia do axônio, diferenciação normal de adipócitos, e promove a ciliogênese primária ao remover OFD1 dos satélites centriolares e degradar IFT20 por autofagia.
• O ATG5 também pode funcionar na apoptose, possivelmente no citoesqueleto modificado. Sua expressão é upregulada em células apoptóticas a jusante da atividade da caspase, e é crucial para a morte celular autofágica induzida por IFN-gama ao interagir com FADD.
• (Infecção microbiana) O ATG5 pode atuar como um fator proviral: ele regula negativamente a resposta imune antiviral inata ao prejudicar a produção de IFN do tipo I após infecção por VSV, e é necessário para o início da tradução e replicação do RNA do vírus da hepatite C. Referências relacionadas: PMID:17709747 PMID:19666601
• Subcelularmente, o ATG5 localiza-se no citoplasma e na membrana da estrutura preautofagossômica. Ele é expresso de forma ubíqua no nível de mRNA, mas a proteína é expressa de forma dramaticamente alta em células apoptóticas.
• As principais modificações pós-traducionais incluem acetilação e formação de uma ligação isopeptídica com ATG12. A proteína está associada a palavras-chave como autofagia, apoptose, interação hospedeiro-vírus, imunidade e neurodegeneração.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético dentro dos aminoácidos 1-100 do ATG5 humano. Valide a especificidade usando linhas celulares knockout para ATG5 ou knockdown por siRNA.
• Para detecção por Western blot (WB), espera-se uma banda em torno de 32-35 kDa (monômero do ATG5; o conjugado ATG12-ATG5 migra mais alto, em ~55 kDa). Considere testar em amostras com indução da autofagia (por exemplo, células em jejum ou tratadas com rapamicina) para aumentar o sinal.
• Em imunofluorescência (IF) e imuno-histoquímica (IHC), o ATG5 apresenta coloração punctiforme citoplasmática que se acumula após a indução da autofagia; otimize a fixação e permeabilização para preservar as estruturas do autofagossomo.
• Para imunoprecipitação (IP), o anticorpo pode capturar tanto o ATG5 livre quanto o conjugado ATG12-ATG5; garanta condições de lise apropriadas para detectar interações proteína-proteína.
• Espera-se reatividade cruzada com camundongo e rato com base na homologia de sequência; não obstante, verifique o desempenho no contexto da espécie e tecido relevantes.

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