Anticorpo policlonal anti-ATP1A4 para WB e ELISA - Q13733

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da ATP1A4

• ATP1A4 codifica a subunidade catalítica alfa-4 específica de espermatozoides da Na+/K+-ATPase, uma bomba de íons transmembrana que acopla a hidrólise de ATP à troca de 3 Na+ para fora e 2 K+ para dentro da célula. Referências relacionadas: PMID:16861705
• Esta isoforma de ATP1A4 é essencial para a motilidade dos espermatozoides, a capacitação e a fertilidade masculina, mantendo os gradientes iônicos necessários para a função flagelar e a sinalização celular (por similaridade).
• A proteína é um componente integral da membrana celular, consistente com seu papel como transportador do tipo ATPase P, e contém pelo menos uma hélice transmembrana e um domínio de ligação ao ATP (Palavras-chave).
• A expressão de ATP1A4 é altamente restrita aos testículos, com a proteína detectada em níveis elevados em espermatozoides maduros e apenas vestígios de mRNA encontrados no músculo esquelético. Referências relacionadas: PMID:16175638, PMID:16861705
• As modificações pós-traducionais incluem fosforilação, e a proteína necessita de Mg2+ para sua atividade enzimática, ligando ATP e os cátions transportados Na+ e K+ (Palavras-chave).
• O splicing alternativo de ATP1A4 produz múltiplas isoformas, que podem apresentar regulação específica de tecidos ou do desenvolvimento (Palavras-chave).
• O gene ATP1A4 pertence à família ATP1A de subunidades alfa da ATPase de sódio/potássio, que também inclui formas expressas ubiquamente, como ATP1A1.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde à região N-terminal (aminoácidos 1-90) de ATP1A4 humano, sugerindo que o anticorpo pode reconhecer preferencialmente a região N-terminal da proteína de comprimento completo; considere isso ao elaborar ensaios de bloqueio ou competição de epítopos.
• Para Western blotting, espera-se uma banda de aproximadamente 114 kDa em amostras de testículo ou de espermatozoides maduros; valide o anticorpo no sistema de amostra relevante (por exemplo, lisados de testículo humano, de camundongo ou de rato), devido à reatividade cruzada relatada.
• Ao utilizar ELISA, o anticorpo pode ser empregado para captura ou detecção de antígenos; realize titulações padrão em tabuleiro de xadrez para determinar as concentrações de trabalho ideais para o formato específico do seu ensaio.
• Considerando a expressão restrita de ATP1A4, certifique-se de incluir amostras de controle negativo (por exemplo, tecidos não testiculares ou linhagens celulares) para confirmar a especificidade.
• O anticorpo é fornecido como um policlonal de coelho, que pode apresentar variabilidade entre lotes; recomenda-se reservar um lote de referência para estudos de reprodutibilidade de longo prazo.

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