Anticorpo Policlonal Anti-ATP6V1E1 para WB, IF/ICC, ELISA - P36543

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do ATP6V1E1

• O ATP6V1E1 codifica a subunidade E 1 da ATPase de prótons do tipo V, também conhecida como subunidade de 31 kDa da V-ATPase (p31), subunidade E 1 da bomba de prótons vacuolar e ATP6E/ATP6E2. O splicing alternativo pode gerar múltiplas isoformas.
• Como uma subunidade do complexo periférico V1 da V-ATPase, participa da hidrólise de ATP para impulsionar o transporte de prótons através das membranas, acidificando assim compartimentos intracelulares como lisossomos, endossomos e vesículas secretoras (PubMed:32001091, PubMed:33065002). Referências relacionadas: PMID:32001091 PMID:33065002
• A V-ATPase também se localiza na membrana plasmática em certos tipos de células, contribuindo para a acidificação extracelular e regulação do pH (PubMed:32001091). Referências relacionadas: PMID:32001091
• O complexo V-ATPase atua como um ativador do mTORC1 em membranas lisossomais ao facilitar a atividade do fator de troca de nucleotídeos guanina (GEF) do complexo Ragulator, promovendo assim o recrutamento do mTORC1 e sinalização anabólica (PubMed:22053050, PubMed:39695235). Referências relacionadas: PMID:22053050 PMID:39695235
• A nível subcelular, o ATP6V1E1 é encontrado na membrana celular apical, membranas de vesículas citoplasmáticas (vesículas sinápticas, vesículas revestidas de clatrina) e membrana lisossomal.
• A proteína é ubiquamente expressa, com níveis elevados no rim (particularmente no néfron distal), pele e detecção generalizada em tecidos (PubMed:29993276, PubMed:12036578, PubMed:28065471). Referências relacionadas: PMID:29993276 PMID:12036578 PMID:28065471
• Modificações pós-traducionais incluem acetilação e fosforilação, conforme indicado por estudos de proteômica, o que pode regular sua montagem ou atividade.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 77-226 do ATP6V1E1 humano, uma região que é bem conservada entre espécies, suportando a reatividade cruzada observada com camundongo e rato.
• Para Western blotting, espera-se uma banda de aproximadamente 26kDa. Use controles positivos apropriados, como lisados de tecido de rim ou HeLa, e considere incluir um controle negativo.
• Em imunofluorescência/ICC, o anticorpo deve reconhecer a V-ATPase em estruturas vesiculares e possivelmente na membrana plasmática. A otimização das condições de permeabilização e fixação é recomendada para cada tipo de célula.
• Aplicações de ELISA podem utilizar o imunógeno recombinante ou fragmentos de peptídeos como antígenos de revestimento; a pré-validação do anticorpo no formato de ensaio escolhido é aconselhada.
• Como um anticorpo policlonal, ele pode detectar múltiplas isoformas decorrentes de splicing alternativo; essa propriedade pode ser vantajosa para detectar os níveis totais de ATP6V1E1.
• Embora a reatividade cruzada com camundongo e rato seja indicada pelo fornecedor, a validação individual em seu sistema específico de amostras é recomendada devido a possíveis variações específicas da espécie na acessibilidade do antígeno.

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