Anticorpo Policlonico de Coelho Anti-ATP7B para WB, IHC-P, ELISA - P35670

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da ATP7B

• Identidade proteica: ATP7B, também conhecida como ATPase 2 transportadora de cobre ou proteína associada à doença de Wilson, é uma ATPase do tipo P transportadora de cobre codificada pelo gene ATP7B (GeneID 540). Pertence à subfamília P1B das ATPases transportadoras de metais pesados.
• Função principal: A ATP7B medeia a exportação de cobre das células dependente de ATP, fundamental para manter a homeostase do cobre. Nos hepatócitos, ela facilita o efluxo de cobre para a bile, especialmente sob níveis intracelulares elevados de cobre, evitando assim o acúmulo tóxico.
• Localização subcelular: Em condições basais de cobre, a ATP7B reside predominantemente na membrana da rede trans-Golgi (RTG), onde fornece cobre às cuproenzimas. Em caso de sobrecarga de cobre, ela se transloca para vesículas citoplasmáticas e a membrana plasmática, além de endossomos tardios e mitocôndrias, para exportar o excesso de cobre.
• Expressão tecidual: A ATP7B é mais abundante no fígado e rim, com menor expressão no cérebro. Também são detectadas uma isoforma específica do cérebro (isoforma 2) e uma forma clivada proteoliticamente de 140 kDa (WND/140 kDa).
• Modificações pós-traducionais e regulação: A proteína sofre fosforilação e splicing alternativo, e um evento de deslocamento de leitura ribossômica pode gerar variantes adicionais. Essas modificações influenciam seu tráfego e atividade catalítica.
• Relevância clínica: Mutações na ATP7B causam a doença de Wilson (WD), uma doença autossômica recessiva caracterizada pelo acúmulo de cobre no fígado e cérebro, levando a sintomas hepáticos e neurológicos. O anticorpo tem como alvo uma região próxima ao terminal C (aa 1251-1351), que pode detectar as formas completa e clivada.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Desenho do imunógeno: O imunógeno abrange os aminoácidos 1251–1351 da região C-terminal, que é bem conservada entre as espécies (explicando a reatividade cruzada com camundongo e rato). Prevê-se que essa região seja citoplasmática com base em modelos de topologia, potencialmente gerando anticorpos que reconhecem tanto o fragmento de comprimento completo quanto o fragmento C-terminal.
• Western blotting: O peso molecular previsto da ATP7B é de ~157 kDa. Use um gel de baixa porcentagem (ex: 6–8%) e garanta condições de transferência adequadas (ex: transferência úmida com redução de metanol) para proteínas de alto peso molecular. O anticorpo também pode detectar a forma clivada de 140 kDa (WND/140) no fígado ou em linhas celulares.
• IHC-P: Otimize a recuperação de antígenos (ex: tampão citrato ou EDTA mediado por calor) e inclua controles apropriados (ex: tecido hepático como controle positivo, controle de isotipo). A coloração nos hepatócitos deve se localizar na RTG e apresentar redistribuição sob desafio com cobre.
• ELISA: O imunógeno recombinante pode servir como padrão para ensaios quantitativos. Valide a linearidade e sensibilidade usando lisados carregados com cobre ou com superexpressão de ATP7B.

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