Anticorpo monoclonal de coelho anti-BCKDHB (E1B) para WB, IHC-P, ELISA - P21953

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da BCKDHB

• BCKDHB codifica a subunidade beta do componente E1 da desidrogenase mitocondrial de alfa-cetoácidos de cadeia ramificada, que forma um complexo com BCKDHA (subunidade alfa) para constituir uma enzima E1 heterotetramérica.
• O complexo BCKD catalisa a descarboxilação oxidativa de alfa-cetoácidos de cadeia ramificada derivados de valina, leucina e isoleucina, produzindo CO2 e derivados de acil-CoA.
• Essa reação é a primeira etapa e a etapa limitante da velocidade no catabolismo dos aminoácidos de cadeia ramificada, conectando a degradação de aminoácidos à produção de energia e à síntese de lipídios.
• O splicing alternativo gera múltiplas variantes de transcritos (palavra-chave do UniProt), regulando potencialmente a função enzimática em diferentes tecidos.
• A proteína está localizada na matriz mitocondrial, em concordância com seu papel no metabolismo mitocondrial.
• As modificações pós-traducionais incluem acetilação (palavra-chave), que pode modular a atividade ou a estabilidade da enzima.
• Mutações em BCKDHB estão associadas à doença da urina do xarope de bordo (MSUD) tipo IB, um distúrbio metabólico caracterizado pelo acúmulo de aminoácidos de cadeia ramificada e seus cetoácidos.
• A proteína é classificada como uma oxidorredutase (palavra-chave), e sua estrutura foi determinada por análise estrutural 3D.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno é uma proteína de fusão recombinante abrangendo os aminoácidos 51-392 de BCKDHB humano. Essa região inclui a sequência da proteína madura, e o anticorpo pode reconhecer epítopos dentro desse domínio central.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto de BCKDHB é de aproximadamente 43 kDa (UniProt: 43122 Da). Pode ser observada uma banda próxima desse tamanho; pequenas alterações devido a modificações pós-traducionais são possíveis.
• Ao realizar imunohistoquímica (IHC-P), a localização mitocondrial pode resultar em uma coloração citoplasmática granular. Valide os padrões de coloração com tecidos de controle positivo e negativo apropriados.
• É relatada reatividade cruzada com ortólogos de camundongo e rato. O alinhamento de sequências pode ser utilizado para avaliar a conservação dos epítopos entre as espécies em aplicações quantitativas.
• Para aplicações em ELISA, o sítio de ligação e a afinidade do anticorpo devem ser determinados empiricamente utilizando o imunógeno recombinante ou a proteína purificada, a fim de estabelecer as condições do ensaio.
• Considere validar o anticorpo em linhagens celulares ou modelos teciduais relevantes para estudos metabólicos, como tecidos hepáticos ou musculares, nos quais a atividade de BCKDH é elevada.

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