Anticorpo Policlonais Anti-beta 2 Microglobulina para WB, IHC-P, ELISA - P61769

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da beta 2 Microglobulina

• Beta-2-microglobulina (B2M) é a cadeia leve do complexo principal de histocompatibilidade classe I (MHC I), essencial para a apresentação de antígenos peptídicos às células T CD8+, desempenhando assim um papel crítico na imunidade adaptativa.
• É uma proteína secretada também encontrada na superfície celular associada não covalentemente à cadeia pesada do MHC I; seu dobramento e montagem são fundamentais para a expressão estável do MHC I.
• A proteína exógena EsxA de Mycobacterium tuberculosis se liga à B2M e reduz sua exportação para a superfície celular, podendo prejudicar a apresentação de antígenos de classe I (PubMed:25356553).
  Referências relacionadas: PMID:25356553
• Estruturalmente, a B2M contém um domínio semelhante a imunoglobulina e é estabilizada por uma ligação dissulfeto intramolecular (Cys25-Cys80). É uma glicoproteína que sofre modificações pós-traducionais, incluindo glicação e formação de piroglutamato N-terminal.
• Mutações no gene B2M estão ligadas à hipoproteinemia hipercatabólica familiar e à amiloidose, na qual pode formar depósitos fibrilares nos tecidos, notavelmente na amiloidose relacionada à diálise.
• Apesar de seu pequeno tamanho (~13,7 kDa teórico), a beta-2-microglobulina migra em aproximadamente 14 kDa em SDS-PAGE sob condições redutoras.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde à forma secretada madura (aminoácidos 21-119), excluindo o peptídeo sinal; o anticorpo pode reconhecer B2M reduzida e não reduzida, mas para resultados consistentes, valide sob condições desnaturantes e redutoras (por exemplo, aquecimento a 95°C com DTT) para romper as ligações dissulfeto.
• Para Western blot, carregue 10–30 µg de lisado total de células ou soro concentrado, e use um controle positivo como tecido rico em linfócitos (baço, linfonodo) ou linhas celulares que expressam MHC I.
• Em imunohistoquímica em cortes de parafina fixados em formalina (IHC-P), realize a recuperação de antígeno com tampão de citrato (pH 6,0) ou tampão EDTA (pH 9,0) e considere um experimento de titulação para otimizar a intensidade da coloração.
• O anticorpo apresenta reatividade cruzada com B2M de camundongo e rato, sendo adequado para modelos roedores; verifique a homologia de sequência e teste lisados de tecidos relevantes para confirmar a reatividade entre espécies.
• Para ELISA, pode ser usado como anticorpo de captura ou detecção; o emparelhamento com outro clone que reconhece um epitopo diferente pode melhorar a sensibilidade em ensaios sanduíche. Otimize os tampões de revestimento e os fatores de diluição.
• Devido à secreção da B2M, amostras sem células podem ser analisadas; para alvos de baixa abundância, pode ser necessário o enriquecimento por imunoprecipitação ou concentração.

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