Anticorpo Policlonal de Coelho Anti-BPI para WB, ELISA - P17213

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do BPI

• A proteína bactericida de aumento da permeabilidade (BPI) é uma glicoproteína secretada de 53,9 kDa pertencente à superfamília BPI/LBP/Plunc, também conhecida como CAP 57. É codificada pelo gene BPI em humanos.
• O BPI exerce potente atividade antimicrobiana seletivamente contra muitas bactérias Gram-negativas, ligando-se com alta afinidade aos lipopolissacarídeos (LPS) na membrana externa bacteriana, levando à permeabilização da membrana e à morte bacteriana.
• Especificamente, o BPI recombinante demonstra atividade antibacteriana contra Pseudomonas aeruginosa, e essa atividade é neutralizada pelo excesso de LPS do mesmo organismo, confirmando o direcionamento dependente de LPS.
• A proteína localiza-se principalmente à membrana dos grânulos citoplasmáticos em células mieloides e é secretada após a ativação de neutrófilos, desempenhando um papel crítico na defesa imune inata.
• A expressão tecidual é restrita a células da linhagem mieloide, incluindo neutrófilos e monócitos, consistente com a sua função na defesa inicial do hospedeiro contra infecção bacteriana.
• Modificações pós-traducionais incluem a formação de ligações dissulfeto e glicosilação, conforme indicado por palavras-chave da UniProt, que são provavelmente importantes para a estabilidade estrutural e a atividade.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde aos aminoácidos 248–487 dentro da região C-terminal do BPI humano. Esta região é distinta do domínio de ligação ao LPS N-terminal, potencialmente permitindo o reconhecimento tanto do BPI de comprimento total quanto de fragmentos C-terminais.
• Para Western blot (WB), considere o uso de condições reduzidas e não reduzidas para avaliar a migração dependente de ligações dissulfeto, pois o BPI contém múltiplas ligações dissulfeto que podem afetar o peso molecular aparente.
• Em aplicações de ELISA, o anticorpo pode ser adequado para detectar BPI nativo ou recombinante em solução; no entanto, as condições ótimas de revestimento e as diluições do anticorpo devem ser determinadas empiricamente.
• Dada a expressão restrita a mieloide, valide a especificidade do anticorpo em linhagens celulares de controle positivo relevantes (por exemplo, HL-60 diferenciado ou neutrófilos primários) e inclua controles de knockout ou peptídeos de bloqueio, sempre que possível.
• A reatividade cruzada com o BPI de camundongo (prevista) deve ser confirmada experimentalmente no sistema de amostra alvo, pois a homologia de sequência na região do imunógeno pode variar.

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