Anticorpo policlonal anti-BRCA1 para WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P38398

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da BRCA1

• BRCA1 é uma proteína de suscetibilidade ao câncer de mama tipo 1 que atua como uma proteína com domínio RING e uma ubiquitina-proteína ligase E3, mediando especificamente a formação de cadeias de poliubiquitina ligadas por 'Lys-6', o que é crucial para o reparo de danos no DNA e a estabilidade genômica. Referências relacionadas: PMID:10500182, PMID:12887909, PMID:12890688

• O heterodímero BRCA1-BARD1 coordena o reparo de danos no DNA, a ubiquitinação e a regulação transcricional, garantindo a integridade genômica. Referências relacionadas: PMID:12890688, PMID:14976165, PMID:20351172

• BRCA1 é necessária para as interrupções do ciclo celular induzidas por radiação ionizante nas fases S e G2, contribuindo para o controle adequado dos pontos de verificação. Referências relacionadas: PMID:10724175, PMID:11836499, PMID:12183412

• Ela regula a nucleação de microtúbulos centrosomais, afetando a segregação cromossômica e a fidelidade mitótica. Referências relacionadas: PMID:18056443

• BRCA1 facilita o reparo por recombinação homóloga ao interagir com PALB2, que promove o recrutamento de BRCA2-RAD51 nas quebras do DNA. Referências relacionadas: PMID:19369211

• Além disso, BRCA1 inibe a síntese lipídica ao se ligar à ACACA fosforilada inativa e atua como ativador transcricional para modular a expressão gênica. Referências relacionadas: PMID:16326698, PMID:20160719

• A proteína sofre fosforilação e acetilação e contém um domínio dedo de zinco do tipo RING essencial para sua atividade de ligase E3. BRCA1 localiza-se predominantemente no núcleo e nos cromossomos, com alguma presença citoplasmática. As isoformas 1 e 3 são amplamente expressas, enquanto a isoforma 3 é frequentemente reduzida ou ausente em linhagens celulares de câncer de mama e ovário.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde a uma região entre os aminoácidos 901-1000; essa região central pode reconhecer a BRCA1 de comprimento total e potencialmente algumas isoformas.
• Para Western blot, considere utilizar lisados celulares totais de linhagens com expressão conhecida de BRCA1 (por exemplo, HeLa, MCF-7) devido ao grande tamanho da proteína, de aproximadamente 208 kDa; assegure condições adequadas de eletroforese em gel e transferência.
• Na imuno-histoquímica (IHC-P), pode ser necessária a recuperação antigênica; valide o anticorpo em tecidos congelados ou incluídos em parafina de acordo com os protocolos padrão.
• Para imunofluorescência/ICC, as condições de fixação e permeabilização devem ser otimizadas para a detecção nuclear e citoplasmática.
• O ELISA pode ser utilizado para detectar fragmentos recombinantes de BRCA1 ou realizar a triagem de anticorpos; considere estratégias com pares de anticorpos para ELISA sanduíche.

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