Anticorpo Monoclonal Anti-CAD de Coelho para WB, IF/ICC, ELISA - P27708

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CAD

• CAD é uma grande enzima multifuncional que codifica as três primeiras atividades da via de biossíntese de novo de pirimidina: carbamoil fosfato sintetase (CPSase), aspartato transcarbamilase (ATCase) e diidroorotase (DHOase).
• A atividade da CPSase envolve um domínio de amidotransferase dependente de glutamina (GATase) que gera amônia, que é então utilizada pelo domínio sintetase para produzir carbamoil fosfato a partir de ATP e bicarbonato.
• O carbamoil fosfato produzido é direcionado ao sítio ativo da ATCase, que catalisa a formação de carbamoil-L-aspartato a partir de L-aspartato.
• Por fim, o domínio DHOase cicliza o carbamoil aspartato para formar diidroorotato, o precursor da síntese de UMP.
• CAD é localizado tanto no citoplasma quanto no núcleo.
• As modificações pós-traducionais do CAD incluem acetilação e fosforilação, que regulam sua atividade e o fluxo da via metabólica.
• Mutações no gene CAD estão associadas a distúrbios congênitos da glicosilação (CDG1Z) e encefalopatia epiléptica do desenvolvimento (DEE50, EIEE50).
• A proteína tem um peso molecular de aproximadamente 243 kDa e contém múltiplos domínios com sítios de ligação para ATP, íons metálicos (magnésio, manganês, zinco) e nucleotídeos.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno é um peptídeo sintético correspondente à região N-terminal (aa 1–100) do CAD humano, provavelmente direcionado ao domínio GATase. Verifique a especificidade em modelos celulares relevantes.
• Para detecção por western blot da proteína de 243 kDa, utilize um gel de poliacrilamida de baixa porcentagem (ex.: 6–8%) e tempos de transferência estendidos para garantir uma transferência eficiente.
• Em IF/ICC, considere a fixação com PFA a 4% e permeabilização com Triton X-100 a 0,1% para detectar tanto as frações citoplasmáticas quanto nucleares.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser aplicado em formatos diretos ou sanduíche; inclua o peptídeo imunogênico como controle positivo.
• A expressão endógena de CAD varia entre os tipos celulares; valide o anticorpo no seu sistema experimental, como células HeLa ou HEK293.
• A reatividade cruzada com espécies diferentes de humanos não foi determinada; realize o alinhamento de sequência se estiver testando amostras não humanas.

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