Anticorpo Policlonal Anti-CARD8 para WB, ELISA - Q9Y2G2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CARD8

• O CARD8 (Proteína 8 contendo domínio de recrutamento de caspase), também conhecido como CARDINAL, TUCAN, NDPP1, DAKAR, DACAR ou NDPP, é umembro da família de proteínas contendo CARD.
• O CARD8 atua como um sensor de inflamassoma, reconhecendo sinais de patógeno/dano, como a atividade da protease do HIV-1 ou o inibidor Val-boroPro, e medeia a ativação do inflamassoma, levando à piroptose de células T CD4+ e macrófagos.
  Referências relacionadas: PMID:11408476, PMID:11821383, PMID:15030775, PMID:32840892, PMID:33542150, PMID:36357533
• A proteína de comprimento total sofre processamento autoproteolítico dentro do domínio FIIND, gerando fragmentos N-terminal e C-terminal que permanecem associados de forma não covalente na ausência de estímulos.
• Após a deteção de patógenos, o fragmento N-terminal é ubiquitinado e degradado pelo proteassoma, libertando o fragmento C-terminal para formar o inflamassoma CARD8, que recruta diretamente a pro-caspase-1 e promove a sua ativação, resultando na clivagem de GSDMD e piroptose.
  Referências relacionadas: PMID:32558991, PMID:32051255, PMID:32840892, PMID:33053349, PMID:34019797
• Para além do seu papel no inflamassoma, o CARD8 também funciona como um regulador negativo da ativação de NF-kappa-B e do inflamassoma NLRP3.
  Referências relacionadas: PMID:11551959, PMID:12067710, PMID:24517500
• O CARD8 localiza-se no citoplasma, núcleo e complexos de inflamassoma montados.
• O CARD8 é altamente expresso no pulmão, ovário, testículo e placenta, com menor expressão no coração, rim e fígado; também é expresso no baço, gânglio linfático e medula óssea.
  Referências relacionadas: PMID:11551959, PMID:11821383
• O CARD8 desempenha um papel na defesa do hospedeiro contra o HIV-1: deteta a atividade da protease do HIV-1, levando à eliminação do vírus latente após a reativação viral, enquanto o HIV-1 pode evitar a deteção mantendo a inatividade da protease nas células infetadas.
  Referências relacionadas: PMID:33542150

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunogénio corresponde à região N-terminal dos aminoácidos 1-200, pelo que o anticorpo provavelmente reconhece o CARD8 de comprimento total e o seu fragmento N-terminal. Considere verificar a especificidade analisando os produtos do processamento autoproteolítico em lisados celulares.
• Para o western blot, use linhas celulares ou tecidos humanos com expressão confirmada de CARD8 (por exemplo, macrófagos THP-1, lisados de pulmão ou ovário). A proteína de comprimento total prevista é de ~61 kDa, mas fragmentos de clivagem também podem ser detetados. Inclua controlos positivos e negativos apropriados.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser utilizado em formatos sanduíche ou indiretos. Emparelhe com um anticorpo detetor contra um epítopo distinto do CARD8 para garantir a especificidade do ensaio.
• Como este anticorpo policlonal é validado para CARD8 humano, a reatividade cruzada com outras espécies deve ser testada experimentalmente. Considere usar ativadores de inflamassoma (por exemplo, Val-boroPro) ou inibidores da protease do HIV-1 em modelos de infeção relevantes para estudar a dinâmica do CARD8.

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