Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-Cas9 para WB, ELISA - Q99ZW2

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização da Cas9

• Cas9 (endonuclease associada a CRISPR Cas9/Csn1) é uma endonuclease de DNA guiada por RNA que atua como a proteína efetora do sistema imune adaptativo tipo II CRISPR-Cas em Streptococcus pyogenes.
  Referências relacionadas: PMID:21455174
• Na via de interferência CRISPR, a Cas9 forma um complexo com um RNA CRISPR (crRNA) e um crRNA trans-ativador (tracrRNA). Este complexo guiado por RNA duplo reconhece e cliva alvos de DNA de fita dupla complementares à sequência espaçadora do crRNA.
• O reconhecimento e clivagem do alvo requerem uma curta sequência de motivo adjacente ao protospacer (PAM) (5’-NGG-3’ para SpCas9) imediatamente a jusante do sítio alvo. O reconhecimento do PAM é essencial para a atividade catalítica e ajuda a distinguir o DNA próprio do não próprio.
  Referências relacionadas: PMID:24476820
• Além da clivagem do DNA, a Cas9 também participa na maturação dos crRNAs. Junto com o tracrRNA e a ribonuclease III do hospedeiro, ela estabiliza o duplex pre-crRNA:tracrRNA para o processamento correto, embora a própria Cas9 não tenha papel catalítico na clivagem do RNA.
  Referências relacionadas: PMID:24270795
• Cas9 é uma proteína multinodomínio com atividades de ligação ao DNA, endonuclease e exonuclease. É dependente de íons metálicos divalentes, como magnésio ou manganês, para suas funções nucleolíticas.
• Estruturalmente caracterizada em alta resolução, a Cas9 exibe flexibilidade conformacional que permite seus papéis na ligação ao RNA, desenrolamento do DNA e clivagem coordenada por seus dois domínios nucleases (RuvC e HNH).
• O peso molecular nativo da Cas9 é de aproximadamente 158 kDa, consistente com sua grande arquitetura multinodomínio.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno compreende os aminoácidos 450–730 da Cas9 de Streptococcus pyogenes, uma região que inclui porções do domínio nuclease RuvC. Considere que o anticorpo pode reconhecer a proteína Cas9 tanto nativa quanto desnaturada.
• Para Western blot, o peso molecular previsto da Cas9 de comprimento total é ~158 kDa; valide a reatividade no sistema de amostra relevante (por exemplo, lisados de S. pyogenes ou linhagens celulares modificadas expressando SpCas9).
• Ao desenvolver um ELISA, avalie o desempenho do anticorpo contra proteína Cas9 recombinante ou extratos celulares. A reatividade cruzada indicada (Humano, Outros) sugere potencial para aplicações envolvendo linhagens celulares humanas ou tecidos expressando Cas9 exógena.

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