Anticorpo monoclonal de coelho anti-Caspase-8 para WB, IP, IF/ICC, ELISA - O89110

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização da Caspase-8

• A Caspase-8 é uma protease tiol que atua como um interruptor molecular para a morte celular programada, integrando sinais de apoptose, necroptose e piroptose para evitar danos teciduais durante o desenvolvimento e a vida adulta. Referências relacionadas: PMID:12065591 PMID:18455983 PMID:30361383
• Ela atua como a caspase iniciadora na via extrínseca da apoptose, sendo recrutada para os receptores de morte (FAS/CD95, TNFRSF1A) por meio de FADD para formar o complexo de sinalização indutor de morte (DISC), onde é ativada proteoliticamente e posteriormente cliva as caspases efetoras downstream (CASP3, CASP6, CASP7) e BID, desencadeando a liberação mitocondrial do citocromo C. Referências relacionadas: PMID:24813849 PMID:24813850 PMID:9654089 PMID:9727491 PMID:9727492
• A Caspase-8 regula negativamente a necroptose ao clivar a RIPK1 em Asp-325, um evento crítico que impede a autofosforilação da RIPK1 e limita a morte celular e a inflamação induzidas por TNF. Referências relacionadas: PMID:31511692
• Em condições específicas (por exemplo, inibição de TAK1), a Caspase-8 pode iniciar a piroptose ao clivar e ativar a gasdermina-C (GSDMC) e a gasdermina-D (GSDMD), levando à formação de poros e à morte celular lítica. Referências relacionadas: PMID:30361383 PMID:30381458
• Ela também atua na imunidade inata ao clivar e inativar o regulador negativo N4BP1 downstream de TLR3 e TLR4, promovendo assim a produção de citocinas. Referências relacionadas: PMID:32971525
• A Caspase-8 é predominantemente citoplasmática, mas também pode se localizar no núcleo. É amplamente expressa, com níveis mais altos no baço, timo, pulmões, fígado e rins, e níveis mais baixos no coração, cérebro, testículos e músculos esqueléticos.
• A proteína está sujeita a acetilação e fosforilação e é sintetizada como um zimógeno inativo que requer dimerização e clivagem para atingir sua atividade plena. Ela pertence à família de proteases dependentes de cisteína e direcionadas a aspartato peptidase C14A.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno abrange os resíduos 1-218 da Caspase-8 de camundongo, incluindo o pró-domínio N-terminal. Considere essa região ao desenvolver estratégias de detecção, pois os anticorpos podem reconhecer tanto as formas de comprimento completo quanto as formas parcialmente processadas.
• Para Western blot, espera-se uma banda em torno de 55 kDa, mas fragmentos menores de clivagem podem aparecer após a indução da apoptose. Valide a especificidade utilizando controles positivos e negativos apropriados no seu sistema celular.
• A imunoprecipitação e a imunofluorescência/ICC são compatíveis com este anticorpo monoclonal de coelho. Otimize as etapas de fixação e permeabilização para alvos intracelulares e inclua controles de isotipo.
• Em ELISA, utilize este anticorpo como reagente de captura ou detecção em formatos sanduíche. Confirme o desempenho com padrões de proteína recombinante para estabelecer a linearidade e a sensibilidade.

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