Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-M6PR Independente de Cátions (IGF2R) para WB, IHC-P, ELISA - P11717

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do M6PR Independente de Cátions (IGF2R)

• O M6PR independente de cátions (IGF2R), também designado receptor de manose 6-fosfato de 300 kDa (MPR300) ou receptor do fator de crescimento semelhante à insulina 2, é uma grande glicoproteína transmembrana codificada pelo gene IGF2R.
• Ele medeia o transporte de enzimas lisossomais fosforiladas do complexo de Golgi e da superfície celular para os lisossomos. Enzimas lisossomais portadoras de resíduos fosfomanosílicos ligam-se especificamente ao receptor, e o complexo receptor-ligante é internalizado, dissociando-se no compartimento pré-lisossomal ácido. O receptor é então reciclado de volta para o Golgi via complexo retrômero. Referências relacionadas: PMID:18817523, PMID:2963003
• Além de seu papel no tráfego dependente de M6P, o IGF2R liga-se ao fator de crescimento semelhante à insulina 2 (IGF2) com alta afinidade, funcionando como um receptor de depuração que regula os níveis extracelulares de IGF2. Referências relacionadas: PMID:18046459
• O IGF2R atua como um regulador positivo da coativação de células T, ligando-se à dipeptidil peptidase 4 (DPP4). Referências relacionadas: PMID:10900005
• O receptor cicla dinamicamente entre a membrana do aparelho de Golgi e os compartimentos endossomais, uma localização essencial para suas funções de triagem e transporte.
• O IGF2R é extensivamente modificado pós-traducionalmente, apresentando glicosilação, ligações dissulfeto, acetilação, metilação, palmitoilação e fosforilação. Sua estrutura inclui um peptídeo sinal, 15 repetições extracitoplasmáticas, uma única hélice transmembrana e uma cauda citoplasmática curta.
• A proteína madura tem um peso molecular previsto de aproximadamente 274 kDa, consistente com sua designação como MPR300.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno corresponde a uma região C-terminal (aa 2140-2300), o que pode favorecer a detecção do IGF2R de comprimento total. Considere usar tecidos ricos em lisossomos ou lisados de linhagens celulares (por exemplo, fígado, placenta ou fibroblastos) como controles positivos para Western blotting.
• Devido ao grande tamanho da proteína (274 kDa), use um gel de poliacrilamida de baixa porcentagem (6–8%) e condições de transferência úmida prolongada (por exemplo, durante a noite a 4°C) para uma membrana de PVDF. Inclua marcadores de alto peso molecular pré-corados para monitorar a eficiência da transferência.
• Para IHC-P, realize a recuperação antigênica apropriada e otimize a diluição do anticorpo primário. Inclua controles de tecido positivo e negativo para validar a especificidade da coloração em amostras humanas e de rato.
• Aplicações de ELISA podem se beneficiar de padrões de proteína recombinante para estabelecer ensaios quantitativos. Se os desenhos experimentais envolverem modelos de roedores, valide a reatividade cruzada em sistemas de rato.
• Sempre valide o anticorpo em seu contexto experimental específico, pois o desempenho pode variar com a preparação da amostra e as condições do ensaio.

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