Anticorpo policlonal de coelho anti-CD11b (ITGAM) para WB, IHC-P, ELISA - P05555

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização de CD11b

• A integrina alfa-M (CD11b), codificada pelo gene Itgam, é membro da família de cadeias alfa das integrinas e combina-se com a subunidade beta-2 (ITGB2/CD18) para formar o receptor do complemento CR3 (Mac-1). O splicing alternativo origina múltiplas isoformas.
• A integrina ITGAM/ITGB2 medeia interações adesivas de monócitos, macrófagos e granulócitos, incluindo a ligação ao fragmento iC3b do complemento C3 e facilitando a captação de partículas e patógenos revestidos pelo complemento (por similaridade).
• Além do complemento, CD11b atua como receptor para fibrinogênio, fator X e ICAM1; reconhece motivos RGD e os peptídeos P1/P2 da cadeia gama do fibrinogênio, promovendo assim a adesão e a migração de leucócitos.
• O receptor desempenha um papel central na migração de neutrófilos e, juntamente com CD18, é necessário para a ativação de neutrófilos previamente estimulados por TNF mediada por CD177-PRTN3 (por similaridade).
• Pode regular a apoptose induzida pela fagocitose em neutrófilos extravasados, contribuindo para a resolução da inflamação (por similaridade).
• No cérebro, CD11b é necessário, juntamente com TYROBP/DAP12 na micróglia, para a produção de íons superóxido que induzem a apoptose neuronal durante o desenvolvimento. Referências relacionadas: PMID:18685038
• Subcelularmente, CD11b está localizado na membrana celular e enriquecido em microdomínios de membrana.
• A expressão específica dos tecidos é observada predominantemente em monócitos, granulócitos, em um subconjunto de mastócitos peritoneais e na micróglia.

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno utilizado para gerar este anticorpo corresponde aos aminoácidos 143–337 de CD11b de camundongo, abrangendo uma porção da região N-terminal extracelular. Esse desenho pode permitir o reconhecimento de conformações proteicas nativas e desnaturadas, tornando-o adequado para Western blot, imuno-histoquímica e ELISA.
• Para a análise por Western blot, CD11b migra aproximadamente a 127 kDa. Considere utilizar um gel de SDS-PAGE de 6–12% e controles positivos apropriados (por exemplo, lisados de macrófagos ou granulócitos) para verificar a especificidade.
• Devido à glicosilação prevista e à estrutura ligada por pontes dissulfeto, as condições redutoras e a preparação otimizada das amostras podem influenciar a detecção. Valide o anticorpo no sistema de amostra relevante para confirmar o desempenho.
• Foi relatado que este anticorpo apresenta reação cruzada com CD11b humano e de rato; no entanto, diferenças de sequência podem afetar a afinidade nessas espécies, portanto recomenda-se a validação independente na espécie-alvo.
• Para aplicações de IHC-P, os protocolos de recuperação antigênica e os métodos de fixação dos tecidos devem ser otimizados para o tipo específico de amostra, a fim de obter a melhor relação sinal-ruído.
• No ELISA, o anticorpo pode ser utilizado para captura ou detecção de CD11b; considere combiná-lo com um anticorpo monoclonal compatível em um formato de ELISA sanduíche para aumentar a sensibilidade.

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