Anticorpo monoclonal de coelho anti-CD14 para WB - P10810

Especificações e parâmetros principais do produto

Contexto biológico: função e localização do CD14

• O antígeno de diferenciação de monócitos CD14 (CD14), também conhecido como glicoproteína rica em leucina específica de células mieloides, é uma glicoproteína de membrana ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI), pertencente à família das repetições ricas em leucina (LRR).
• O CD14 atua como correceptor do lipopolissacarídeo bacteriano (LPS) em conjunto com a proteína ligadora de LPS (LBP), entregando o LPS ao complexo LY96/TLR4 para iniciar respostas imunes inatas (PubMed:16148141).
  Referências relacionadas:
  PMID:16148141
• A sinalização downstream por meio de MyD88, TIRAP e TRAF6 leva à ativação de NF-kappa-B, à secreção de citocinas e à resposta inflamatória (PubMed:15895089, PubMed:8612135).
  Referências relacionadas:
  PMID:15895089, PMID:8612135
• O CD14 atua como correceptor para os heterodímeros TLR2:TLR6 e TLR2:TLR1 em resposta a lipopeptídeos diacilados e triacilados, respectivamente; esses complexos desencadeiam a sinalização a partir da superfície celular e são direcionados ao complexo de Golgi de maneira dependente de jangadas lipídicas.
• Como receptor auxiliar, o CD14 liga-se às lipoproteínas LprA, LprG e LpqH de M. tuberculosis em conjunto com TLR2 e TLR1, modulando as funções das células apresentadoras de antígenos (PubMed:19362712).
  Referências relacionadas:
  PMID:19362712
• O CD14 também se liga à LDL eletronegativa (LDL(-)) e medeia a liberação de citocinas induzida por LDL(-).
• A localização subcelular inclui a membrana celular, as jangadas de membrana e o complexo de Golgi; a proteína também pode ser secretada na forma solúvel.
• Detectado em macrófagos peritoneais, macrófagos alveolares pulmonares, macrófagos dendríticos e macrófagos pulmonares em nível proteico (PubMed:8612135, PubMed:19362712).
  Referências relacionadas:
  PMID:8612135, PMID:19362712

Orientações experimentais e dicas técnicas

• O imunógeno corresponde ao domínio extracelular (resíduos 18-345) do CD14 de camundongo, que abrange a região de repetições ricas em leucina; esse design pode ser útil para detectar tanto as formas de CD14 ligadas à membrana quanto as formas solúveis.
• Para Western blot, o peso molecular previsto do CD14 é de aproximadamente 39 kDa; no entanto, devido à glicosilação, a banda observada pode migrar em uma posição ligeiramente superior. Considere o uso de um tampão adequado de bloqueio e lise para preservar os epítopos.
• A citometria de fluxo pode ser utilizada para analisar a expressão do CD14 na superfície celular de macrófagos e monócitos; certifique-se de utilizar uma estratégia adequada de gating e controles de isotipo para amostras de camundongo.
• O ELISA pode ser adequado para detectar CD14 solúvel ou estudar interações de ligação ao LPS; otimize as condições de revestimento e os anticorpos de detecção para o formato específico do ensaio.
• Valide o anticorpo no sistema de amostra relevante, como macrófagos peritoneais de camundongo ou populações de macrófagos pulmonares, para confirmar a reatividade e a especificidade.

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