Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-CD16b para WB, FC, ELISA - O75015

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD16b

• CD16b (FcγRIIIB) é um receptor de baixa afinidade para a região Fc de imunoglobulinas gama, codificado pelo gene FCGR3B. É uma glicoproteína ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) sem domínio transmembranar, o que a distingue da FcγRIIIA.
• O receptor liga IgG complexada ou agregada e IgG monomérica, mas ao contrário da FcγRIIIA, não media a citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) nem a fagocitose, provavelmente funcionando como um receptor isca que captura complexos imunes na circulação periférica sem ativar neutrófilos.
• CD16b é expresso especificamente por leucócitos polimorfonucleares (neutrófilos) e por eosinófilos estimulados, destacando seu papel na vigilância imune inata em granulócitos.
• Subcelularmente, CD16b é encontrado na membrana celular e pode ser liberado em forma secretada, por meio da clivagem de sua âncora GPI.
• A proteína contém dois domínios semelhantes a imunoglobulinas e é extensivamente glicosilada; um peso molecular previsto de aproximadamente 26 kDa (proteína central de 26.243 Da) é frequentemente observado como uma banda difusa devido à glicosilação.
• As características estruturais principais incluem um peptídeo sinal N-terminal (aa 1-18), o domínio extracelular de ligação a IgG (aa 20-208, usado como imunógeno) e um sítio de ligação da âncora GPI C-terminal. Vários apelidos (CD16, FCG3, FCGR3, FCR-10, FCRIII) refletem a nomenclatura histórica.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno cobre todo o domínio extracelular de ligação a IgG (aa 20-208) do CD16b humano, sendo adequado para detectar proteínas nativas e desnaturadas em diferentes aplicações.
• Para Western blot (WB), é esperada uma banda em torno de 26 kDa em condições redutoras; pode ocorrer manchamento ou banda difusa devido à glicosilação — valide com controles positivos adequados (ex.: lisados de neutrófilos) e considere a desglicosilação se uma banda nítida for necessária.
• Em citometria de fluxo (FC), use um anticorpo secundário conjugado com fluoróforo compatível para detectar CD16b de superfície em neutrófilos vivos não fixados; evite métodos de fixação que possam alterar a integridade da proteína ancorada por GPI.
• Para ELISA, o anticorpo pode ser usado como reagente de captura ou detecção; recomenda-se o pareamento com um clone não competidor de anti-CD16b para formatos sanduíche, e as condições do ensaio devem ser otimizadas com proteína CD16b recombinante ou purificada.
• A reatividade cruzada é limitada a humanos; não é esperada reatividade com CD16b de camundongo ou rato, portanto escolha um sistema modelo adequado ou valide com amostras humanas.

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