Anticorpo Monoclonal Anti-CD4 para Citometria de Fluxo - P01730

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD4

• O CD4 é uma glicoproteína transmembrana e membro da superfamília das imunoglobulinas, composta por uma região extracelular com quatro domínios do tipo Ig (D1–D4), uma única hélice transmembrana de passagem única e uma cauda citoplasmática curta. É expresso principalmente na superfície das células T auxiliares, bem como em monócitos, macrófagos, células dendríticas e células NK.
• Em células T auxiliares, o CD4 funciona como coreceptor para moléculas MHC de classe II. Ele se liga a regiões não polimórficas do MHC de classe II em células apresentadoras de antígeno, estabilizando a interação entre o receptor de célula T (TCR) e os complexos peptídeo-MHC, o que é essencial para o reconhecimento de antígenos e a ativação de células T.
• Após o acoplamento ao TCR, o CD4 recruta a quinase LCK da família Src através da sua cauda citoplasmática para a proximidade do complexo TCR-CD3. A LCK fosforila os motivos de ativação baseados em tirosina dos imunorreceptores (ITAMs) nas cadeias CD3, iniciando cascatas de sinalização intracelular que levam à proliferação de células T, produção de citocinas e diferenciação.
• Além do seu papel na imunidade adaptativa, o CD4 atua como o receptor principal do vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) através da interação com a glicoproteína do envelope viral gp120. Ele também funciona como receptor para o herpesvírus humano 7 (HHV-7). As proteínas Vpu e Nef do HIV-1 regulam negativamente a expressão superficial do CD4 para facilitar a saída viral e a evasão imunológica. Referências relacionadas: PMID:12089508 PMID:16331979 PMID:2214026 PMID:17346169 PMID:7909607
• O CD4 sofre modificações pós-traducionais por glicosilação N-ligada, formação de pontes dissulfeto, palmitoilação em uma cisteína juxtamembrana e fosforilação pela LCK. Essas modificações regulam o enovelamento da proteína, a localização na membrana e a transdução de sinal.
• A expressão de CD4 é uma característica definidora das células T auxiliares e é comumente usada como marcador imunofenotípico para a identificação de subconjuntos de células T. Sua densidade superficial pode variar de acordo com o estado de ativação e diferenciação celular.
• Em macrófagos e células NK, o acoplamento do CD4 pode desencadear diferenciação, expressão de citocinas e migração celular por vias independentes de TCR/LCK, destacando sua versatilidade funcional além da sinalização em células T.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• Este anticorpo é conjugado diretamente ao , um fluoróforo vermelho distante brilhante e fotorresistente, pronto para uso em citometria de fluxo. Titule o anticorpo para determinar a concentração de coloração ideal para o seu tipo celular específico e condições experimentais (faixa típica: 0,1–1 µg por 1×10^6 células).
• Como a expressão superficial de CD4 é alta em células T auxiliares em repouso, inclua controles de isotipo adequados e discriminação entre células vivas e mortas para garantir uma coloração específica. Para painéis multicoloridos, combine com anti-CD3 e anti-CD8 para analisar detalhadamente os subconjuntos de células T.
• O anticorpo tem reatividade cruzada com CD4 humano e de cynomolgo, tornando-o adequado para estudos que envolvem modelos de primatas não humanos. Valide o anticorpo na sua matriz de amostra específica e no seu protocolo de fixação/permeabilização se for necessária coloração intracelular.
• O imunógeno é o CD4 humano recombinante, correspondendo provavelmente ao domínio extracelular. Portanto, o anticorpo pode reconhecer preferencialmente o CD4 nativo não desnaturado; condições desnaturantes (por exemplo, western blotting em condições redutoras) podem exigir validação.
• Para aplicações além da citometria de fluxo, como imunohistoquímica ou imunoprecipitação, a otimização e a verificação independente são recomendadas devido à falta de dados do fabricante.

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