Anticorpo Policlonial de Coelho Anti-CD4 para WB, IF/ICC, IF-P, ELISA - P01730

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD4

• O CD4 é uma glicoproteína integral de membrana de 51 kDa, também conhecida como antígeno de superfície de células T T4/Leu-3, pertencente à superfamília das imunoglobulinas. Ele contém quatro domínios extracelulares semelhantes a Ig (D1–D4), uma única hélice transmembranar e uma cauda citoplasmática que interage com a quinase Src LCK.
• Em células T helper, o CD4 funciona como um coreceptor para moléculas MHC de classe II. Ele liga simultaneamente o receptor de célula T (TCR) e o MHC de classe II em células apresentadoras de antígeno, recrutando LCK para fosforilar substratos do complexo TCR-CD3, o que inicia cascatas de sinalização que levam à ativação de células T, produção de linfocinas e proliferação.
• O CD4 é fundamental para o desenvolvimento de timócitos e a diferenciação de células T helper. Ele também desencadeia a maturação de monócitos em macrófagos, destacando seu papel na imunidade inata e adaptativa.
• Além das células T, o CD4 é expresso em macrófagos, células dendríticas e células NK, onde modula a diferenciação, a expressão de citocinas e a migração celular através de vias independentes de TCR/LCK.
• O CD4 atua como o receptor principal do vírus da imunodeficiência humana tipo 1 (HIV-1) por meio de seu domínio D1, facilitando a entrada viral. Ele também é um receptor do Vírus Herpes Humano 7 (HHV-7). A infecção pelo HIV-1 leva à redução da expressão de CD4 pela proteína viral Vpu. Referências relacionadas: PMID:12089508, PMID:16331979, PMID:2214026, PMID:17346169, PMID:7909607
• A localização subcelular é predominantemente na membrana celular, consistente com sua função como receptor de superfície. Uma forma solúvel pode ser liberada após a ativação de células T.
• É altamente expresso em células T helper, mas também encontrado em outras células imunes como macrófagos, células dendríticas e células NK. A expressão de CD4 é um marcador definidor para a identificação de células T helper.
• As modificações pós-traducionais incluem glicosilação N-ligada, pontes dissulfeto dentro dos domínios Ig e palmitoilação na cauda citoplasmática, que podem modular a localização em microdomínios de membrana e a sinalização.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange o domínio extracelular (aa 26‑200) da CD4 humana, cobrindo os sítios de ligação ao MHC de classe II e à gp120 do HIV-1. Este design pode permitir a detecção de CD4 de comprimento completo em western blots desnaturantes, bem como de conformações nativas em imunofluorescência e ELISA.
• Para western blotting, é esperada uma banda em torno de 51 kDa sob condições redutoras. A glicosilação pode fazer com que o peso molecular aparente seja maior (55–60 kDa). Inclua controles positivos adequados (por exemplo, lisados de Jurkat ou PBMC humanas) e considere o uso de agente redutor.
• A reatividade cruzada relatada com CD4 de camundongo e rato deve ser verificada em seus modelos experimentais específicos. O alinhamento de sequência mostra ~70% de identidade na região extracelular; recomenda-se a titulação do anticorpo primário e uma validação cuidadosa.
• O anticorpo pode ser aplicado em formatos de imunofluorescência indireta (IF/ICC) e ELISA. Garanta protocolos de fixação e permeabilização adequados para IF; para coloração de superfície celular, evite a permeabilização. Valide no tipo de célula ou tecido relevante.
• Ao usar para estudos funcionais (por exemplo, bloqueio da ligação do HIV‑1), observe que a natureza policlonal pode gerar resultados variáveis; formatos monoclonais podem ser preferidos para um bloqueio consistente e específico de epítopo.

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