Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-CD44 (Validado por KO) para WB, IHC-P, IF/ICC, FC, ELISA - P16070

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD44

• CD44 é uma proteína de membrana tipo I de passagem única que atua como o receptor principal do hialuronano (HA) e também interage com colágeno, fatores de crescimento, citocinas e proteases, permitindo que as células detectem e respondam às alterações do microambiente tecidual. Referências relacionadas: PMID:16541107, PMID:19703720, PMID:22726066, PMID:18757307, PMID:23589287
• CD44 medeia a ativação, direcionamento e recirculação de linfócitos, além da hematopoese e respostas inflamatórias à infecção bacteriana. Referências relacionadas: PMID:7528188
• A sinalização intracelular do CD44 envolve a montagem de complexos proteicos com quinases receptoras e proteases de membrana, levando à ativação de PKN2, RAC1, RHOA e fosfolipase C, que promovem a reorganização do citoesqueleto e a mobilização de cálcio. Referências relacionadas: PMID:18757307, PMID:23589287, PMID:15123640
• A proteína se localiza principalmente na membrana plasmática e microvilosidades, mas um ectodomínio solúvel pode ser liberado para o espaço extracelular.
• O splicing alternativo gera múltiplas isoformas; a isoforma epitelial 10 (CD44v) é altamente expressa em carcinomas, enquanto as células de neuroblastoma reprimem sua expressão.
• No nível proteico, CD44 é detectado em fibroblastos, urina e placenta. Referências relacionadas: PMID:25326458, PMID:36213313, PMID:37453717, PMID:32337544
• A proteína é intensamente modificada por glicosilação, fosforilação e adição de proteoglicanos, e apresenta pontes dissulfeto; ela também está envolvida na internalização do vírus da febre aftosa.

Orientações Experimentais e Dicas Técnicas

• O imunógeno abrange o domínio N-terminal de ligação ao hialuronano (aa 20–178), que é conservado e exposto na superfície; portanto, este anticorpo pode detectar múltiplas isoformas de CD44 e conformações nativas em aplicações como WB e IF/ICC.
• Para Western blotting, o peso molecular previsto é de ~82 kDa, mas a glicosilação extensiva pode causar um padrão de banda difuso ou semelhante a uma escada; considere o pré-tratamento com PNGase F ou outras deglicosilases para confirmar a especificidade.
• Em imuno-histoquímica e imunofluorescência, valide a especificidade usando linhagens celulares/tecidos controle com knockdown ou knockout de CD44 para confirmar os padrões de coloração.
• Para citometria de fluxo, otimize a titulação do anticorpo e inclua controles de isotipo para quantificar com precisão a expressão de CD44 em subconjuntos de linfócitos, células de carcinoma ou outras populações relevantes.
• Considerando a liberação do ectodomínio de CD44, a preparação de amostras para ensaios baseados em ELISA deve levar em conta se é para detectar CD44 solúvel total ou isoformas específicas; inclua padrões adequados e etapas de bloqueio.

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