Anticorpo Monoclonal de Coelho Anti-CD45 para FC, ELISA - P08575

Especificações e Parâmetros Principais do Produto

Contexto Biológico: Função e Localização do CD45

• O CD45, também conhecido como antígeno leucocitário comum (L-CA) ou T200, é uma proteína tirosina fosfatase do tipo receptor (PTPRC) que desempenha um papel crítico na sinalização de células imunes.
• Funciona como um regulador positivo da coativação de células T após ligação à DPP4. O primeiro domínio PTPase tem atividade enzimática, enquanto o segundo parece afetar a especificidade do substrato do primeiro. Após a ativação das células T, recruta e desfosforila a SKAP1 e a FYN. Desfosforila a LYN, modulando assim a sua atividade. Referências relacionadas: PMID:35767951
• O CD45 interage com a CLEC10A na interface célula apresentadora de antígeno-célula T, contribuindo para a modulação dos limiares de ativação das células T e prevenindo a autorreatividade.
• Isoformas resultantes de splicing alternativo (variando da isoforma 1 à 8) são expressas diferencialmente em timócitos, com as isoformas 1,2,3,5,7 detectadas e outras não. Os múltiplos pesos proteicos (131–147 kDa) refletem essa diversidade de isoformas.
• Subcelularmente, o CD45 localiza-se na membrana celular, nos microdomínios de membrana (rafts) e na sinapse imunológica, consistente com o seu papel na sinalização proximal do receptor de células T.
• Como fator do hospedeiro, o CD45 atua como receptor para a proteína UL11 do citomegalovírus humano, mediando a ligação viral às células T e o subsequente comprometimento da proliferação e sinalização das células T.
• Modificações pós-traducionais incluem glicosilação extensa, fosforilação e a presença de um peptídeo sinal, uma hélice transmembrana e domínios fosfatase em tandem.
• Expresso amplamente em todas as células hematopoiéticas nucleadas, o CD45 é essencial para o desenvolvimento e ativação dos linfócitos, tornando-o um marcador de diagnóstico chave para a identificação de leucócitos.

Orientação Experimental e Dicas Técnicas

• O imunógeno utilizado (aminoácidos 26–577) abrange a região extracelular do CD45 humano, incluindo múltiplos domínios específicos de isoformas; esta ampla região sugere que o anticorpo pode reconhecer várias isoformas de CD45 em conformações nativas.
• Para citometria de fluxo (FC), considere titular o anticorpo em subpopulações de leucócitos humanos relevantes (ex.: PBMCs, células Jurkat) para determinar as concentrações ótimas de coloração; inclua controles de isotipo para avaliar ligação inespecífica.
• Para aplicações de ELISA, avalie formatos diretos ou de captura usando proteína CD45 recombinante ou lisados celulares; confirme a linearidade e sensibilidade com curvas padrão.
• Como o CD45 é altamente glicosilado, certifique-se de que a ligação do anticorpo não é prejudicada pela glicosilação em certos tipos de amostra; condições desnaturantes podem afetar a acessibilidade do epítopo.
• O anticorpo é fornecido em gelo; alíquote e armazene nas temperaturas recomendadas (ex.: -20°C) para manter a estabilidade e evitar ciclos repetidos de congelação-descongelação.

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